[发明专利]一种壬基酚半抗原和抗原及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种壬基酚半抗原，其结构为式I所示化合物：

式I。

2.制备权利要求1所述化合物的方法，包括步骤为：

在壬基酚中加入DMF、NaH，所述壬基酚、DMF、NaH的配比为1000mg：30ml：50mg，室温反应15 min获得反应液；在反应液中加入200mg 4-溴丁酸乙酯，40℃油浴条件下反应，25ml乙酸乙酯萃取，蒸干，加入12mL乙酸乙酯将残留物溶解，称量2倍重量的硅胶加入其中，旋蒸干，准备硅胶柱上样；将混合好的硅胶样品使用干样加样法进行加样，用石油醚：乙酸乙酯体系淋洗，收集淋洗液，收集旋蒸产物；产物用7 mL甲醇溶解，按2倍物质的量加入2 M NaOH溶液，40℃下加热，水解完全后，用6M的HCl调节pH到2；将反应液用50mL乙酸乙酯萃取，收集有机相，加入无水硫酸钠；过滤，旋蒸干，得到式I所述化合物。

3.壬基酚抗原，为将权利要求1所述化合物与载体蛋白偶联所得的抗原。

4.根据权利要求3所述的壬基酚抗原，其特征在于：所述载体蛋白可以是牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白、血蓝蛋白、鼠血清蛋白、甲状腺蛋白或兔血清蛋白。

5.权利要求3或4所述的壬基酚抗原的制备方法，包括如下步骤：将权利要求1所述化合物与载体蛋白通过酰胺键偶联，获得所述壬基酚抗原；权利要求1所述化合物与所述载体蛋白偶联的摩尔比为9.4：1。

6.根据权利要求5所述的壬基酚抗原的制备方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

（1）将所述壬基酚半抗原溶解于DMF中，然后加入EDC和NHS，20-25℃磁力搅拌反应2-3h，得到溶液I；

其中，所述壬基酚半抗原、所述DMF、所述EDC、所述NHS的配比为20mg：1.5mL：21.5mg：13mg；

（2）将所述载体蛋白置于0.1M碳酸氢钠缓冲液中，200rpm搅拌10min，充分溶解，得到溶液II；所述载体蛋白与所述0.1M碳酸氢钠缓冲液的配比为33.6-50mg：3.5mL；

（3）将所述溶液I和所述溶液II混合，具体为在0-4℃条件下，1000rpm搅拌下，将溶液I逐滴加入到所述溶液II中，500rpm搅拌反应24h，得到溶液III；

（4）用0.01M PBS，pH7.2磷酸盐缓冲液，于4℃对所述溶液III搅拌透析3天，得到所述壬基酚抗原。

7.权利要求1所述化合物或权利要求3所述壬基酚抗原的应用，其特征在于定性或定量检测壬基酚；制备壬基酚抗体。

8.利用权利要求3所述壬基酚抗原制备的抗体。

9.根据权利要求7所述的壬基酚抗原的应用，其特征在于可以为制备酶联免疫试剂盒、胶体金检测卡和免疫亲和柱。

10.根据权利要求7所述的壬基酚抗原的应用，其特征在于检测样本可以为鸡蛋、牛奶和肉类，所述检测上述样本中壬基酚的检测限为1μg/kg，灵敏度为0.1μg/kg。