[发明专利]一种壬基酚半抗原和抗原及其制备方法和用途

说明书

本发明公开了一种内分泌干扰物壬基酚半抗原和抗原及其制备方法与应用。本发明所提供的壬基酚人工抗原为将式I所示的壬基酚半抗原与载体蛋白偶联所得的抗原。本发明所提供壬基酚人工抗原合成方法简单，纯度高和产率高，对于壬基酚抗体的制备，以及食品中壬基酚残留检测具有重大价值。

技术领域

本发明属于食品中内分泌干扰素净化、检测领域，涉及一种壬基酚半抗原和抗原及其制备方法和用途。

背景技术

内分泌干扰物（Environmental endocrine disrupting chemicals，EDCs），是一种在环境中存在的干扰人或动物内分泌系统的外源性化学物质，多数通过食物链进入生物体内，引起生物体自身荷尔蒙被干扰，在血液中循环、脂肪中积累，从而导致生物体正常的生殖、发育、免疫、行为活动等生理系统异常。壬基酚（Nonyl Phenol，NP）是一种典型的内分泌干扰物，其结构与人和动物的雌激素十分相似，具有明显的雌激素效应，可以干扰人体内分泌的正常作用。NP是一种重要的精细化工原料和中间体，广泛应用于食品包装材料、食品贮藏容器以及工业洗涤剂、塑料增塑剂和稳定剂等，且食品用量正在逐年增加。有研究表明在矿泉水、碳酸饮料、罐头类食品中均有检出，人类通过摄食食品而暴露于这类物质中，据报道人体的尿液、血清和母乳中都存在着不同水平的NP。NP在环境中很难降解，且毒性大、滞留时间较长，通过食物链进入到人体中，也可以通过皮肤、呼吸、消化道等途径接触从而影响肝、肾、脾、肺等多种器官的健康。

对食物中的壬基酚的残留水平进行准确测定是非常必要的。壬基酚目前的检测方法主要有气相色谱法和气-质联用法、液相色谱法和液-质联用法等。样品前处理方法主要包括液液萃取、固相萃取、基质固相分散萃取和加速溶剂萃取等。这些方法存在选择性差、有机溶剂使用量大、操作复杂和不同基质间重现性差等缺点，而且操作繁琐、仪器昂贵。免疫化学分析法在抗原抗体的定性定量方面具有独特的优势，其操作简便快速、成本低、灵敏度较高、分析样本量大，弥补了理化分析的不足。

影响免疫化学分析质量的根本因素是抗体的特异性与亲和性，这些性质又决定于免疫半抗原分子的结构，因此免疫半抗原的分子设计与合成是产生特异性抗体和建立小分子物质残留快速检测技术的最基础、最关键的步骤。

发明内容

本发明的目的是提供一种壬基酚半抗原、人工抗原及其制备方法和用途。

本发明所提供的壬基酚半抗原，其结构如式I所示：

式I。

本发明所提供的制备所述式I的方法，具体可包括如下步骤：

在壬基酚中加入二甲基甲酰胺（DMF）、氢化钠（NaH），所述壬基酚、DMF、NaH的配比为1000mg：30ml：50mg，室温反应15 min获得反应液；在反应液中加入200mg 4-溴丁酸乙酯，40℃油浴条件下反应，25ml乙酸乙酯萃取，蒸干，加入12mL乙酸乙酯将残留物溶解，称量2倍重量的硅胶加入其中，旋蒸干，准备硅胶柱上样。将混合好的硅胶样品使用干样加样法进行加样，用石油醚：乙酸乙酯体系淋洗，收集淋洗液，收集旋蒸产物。产物用7 mL甲醇溶解，按2倍物质的量加入2 M NaOH溶液，40℃下加热，水解完全后，用6M的HCl调节pH到2。将反应液用50mL乙酸乙酯萃取，收集有机相，加入无水硫酸钠（按10%有机相体积的量加入），加入后磁力搅拌1 h。过滤，旋蒸干。得到式I所述化合物。

在壬基酚半抗原的基础上构建所得的壬基酚抗原也属于本发明的保护范围。

所述壬基酚抗原，为将所述壬基酚半抗原（式I）与载体蛋白偶联所得的抗原。在本发明的一个实施例中，所述载体蛋白具体为牛血清白蛋白（BSA）或卵清蛋白（OVA）。

所述壬基酚抗原的制备方法也属于本发明的保护范围。