[发明专利]一种牛种布氏菌快速检测方法在审
| 申请号： | 201711402372.7 | 申请日： | 2017-12-22 |
| 公开（公告）号： | CN108148893A | 公开（公告）日： | 2018-06-12 |
| 发明（设计）人： | 陈义平;秦立得;南文龙;谭鹏飞;巩明霞;张凤霞 | 申请（专利权）人： | 中国动物卫生与流行病学中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 266032 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 布氏菌 引物组 恒温培养箱 高效灵敏 恒温条件 鉴别检测 交叉反应 快速检测 快速鉴别 扩增模板 设备检测 数量限制 特异性强 样品检测 高通量 检出限 一次性 疫苗株 扩增 水浴 检测 配置 | ||
1.一种用于鉴别牛种布氏菌的引物组，其特征在于，所述的引物组包含有两对引物；
其中第一引物对的上游引物的序列为SEQ ID NO:1；下游引物的序列为SEQ ID NO:2；
第二引物对的上游引物的序列为SEQ ID NO:3；下游引物的序列为SEQ ID NO:4。
2.权利要求1所述的引物组在制备检测牛种布氏菌的制品中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的制品为检测试剂盒。
4.一种检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中包含有权利要求1所述的引物组。
5.权利要求4所述的试剂盒在检测牛种布氏菌中的应用。
6.一种检测牛种布氏菌的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：
1)待检测基因组DNA的提取：
用细菌基因组DNA提取试剂盒提取待检测样品的细菌DNA；
2)RPA步骤：
将权利要求1所述的引物组及各反应组分，分别加入反应体系中，39℃反应30min；
3)结果检测：回收纯化RPA反应产物，2％琼脂糖凝胶电泳检测，判定检测结果。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的方法中判定检测结果，如果第一引物对的扩增产物为阳性，而第二引物对的扩增产物为阴性；则待检测菌株为牛种布氏菌株；如果第一引物对的扩增产物为阳性，第二引物对的扩增产物为阳性，则待检测菌株为非牛种布氏菌的其它布氏菌菌株。
8.一种判定牛种布氏菌的检测标准，其特征在于，所述的标准，是对于待检测的布氏菌菌株，其权利要求1所述的第一引物对的扩增产物为阳性，而第二引物对的扩增产物为阴性；则待检测菌株为牛种布氏菌株；如果第一引物对的扩增产物为阳性，第二引物对的扩增产物为阳性，则待检测菌株为非牛种布氏菌的其它布氏菌菌株。
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