[发明专利]一组着丝粒蛋白F（CENPF）分片段抗原及其应用

说明书

本发明为一组着丝粒蛋白F（CENPF）分片段抗原及其应用，涉及一组血清CENPF分片段抗原，其组合可显著提高血清标本中CENPF抗体检测的敏感度和特异性。本发明将8种重组CENPF分片段抗原制备蛋白芯片，用于血清标本中的CENPF抗体水平的测定，根据8个重组CENPF分片段抗原检测血清CENPF抗体水平的高低，来综合评估早期肝细胞癌患者或高危人群的疾病状态，提供了一种新的肝细胞癌筛查及早期诊断方法。

技术领域

本发明涉及一组着丝粒蛋白F(CENPF)分片段抗原及其在血清自身抗体检测中的应用。

背景技术

肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)是原发性肝癌的主要类型。由于HCC缺乏早期症状，大部分病人出现症状时已属中晚期，失去有效治疗的机会，存活期一般少于1年，早期HCC通过切除术或肝移植，5年生存率在60-70％以上。因此，通过对高危人群的定期筛查及时发现和诊断早期病例至关重要。但目前临床上仍缺乏敏感度高、特异性好，且具有临床可操作性的HCC筛查及早期诊断方法。

理想的HCC早期诊断方法不仅要有较高的特异性，能够将HCC与肝硬化、肝炎等区别开来，还要有较高的敏感性，能够在肝细胞癌的早期阶段即能检出。此外，作为HCC的筛查及早期诊断方法，还必须具备临床可操作性，如简便经济，尤其是对患者创伤最小而易于被接受等。作为目前临床常用的HCC筛查和诊断方法，超声检查虽然无创但高度依赖临床医生的个人经验且不易从肝硬化背景中发现早期HCC；CT及MRI检查能显著提高早期HCC的检出率，但需要使用专门的仪器设备，费用非常昂贵；肝穿刺组织病理学检查虽然仍是早期HCC诊断的金标准，但由于侵入性特点、操作复杂且难度大，不易为病人接受。比较而言，通过检测病人血清标志物实现HCC的早期诊断无疑具有独特的优势和很强的可操作性。

目前已用于HCC临床诊断的血清标志物主要为甲胎蛋白(AFP)，由于受研究设计(回顾性研究和前瞻性研究)、HCC病因学因素、受检人群及所设定的临界值不同等因素的影响，AFP的敏感度和特异度存在较大的差异。大多数临床研究结果表明，当临界值为20ng/ml时，AFP诊断HCC的敏感度和特异度分别为40％～65％和75％～90％不等。而且，只有当AFP血清浓度达到500ng/ml时才表现出很好的特异性，提示AFP作为HCC诊断标志物特异性高但敏感度不够，可能不适合HCC的早期诊断。近年来出现的AFP异构体(AFP-L3)和异常凝血酶原(DCP)的敏感度或特异性有了一定的提高，可与AFP联合使用以提高敏感度。其他仍处于实验室研究阶段的HCC血清标志物还包括硫酸肝素多糖3(GPC3)、高尔基蛋白73(GP73)、生长因子或细胞因子(如TGFβ1、IGF-II、HGF等)以及一些酶和同工酶(如GGT-II、AFU、AAG)等。近年来，随着以蛋白质双向电泳、新型质谱分析为主的蛋白质组学方法的应用，为寻找新型HCC标志物提供了强有利的工具，已报导筛选出一些新的潜在血清标志物。但总体说来，目前已有的或已报道的血清标志物均不同程度存在检测敏感度或特异性问题，大都距临床实际应用较远，尤其是用于HCC的早期诊断。

近年来的研究发现，在肿瘤发生发展的过程中，由于机体免疫状态的变化，患者体内会出现针对某些自体细胞抗原的抗体免疫反应。这些自体细胞抗原又称为肿瘤相关抗原(Tumor Associated Antigens，TAAs)。通过检测外周血中这些针对自身抗原成分的自身抗体可以区分正常人和癌症患者。由于当肿瘤相关抗原水平很低，利用常规蛋白检测方法无法检测到时，免疫系统就能监测到该特异蛋白的存在，从而引发免疫反应产生大量的抗体。因此自身抗体检测方法与抗原检测方法相比具有更高的敏感度，血清自身抗体有可能成为用于癌症早期诊断的非常有前景的标志物。