[发明专利]一种在部分肝脏切除术后促进小鼠肝种植瘤生长的方法

说明书

一种在部分肝脏切除术后促进小鼠肝种植瘤生长的方法，包括小鼠肝癌细胞系的培养、裸鼠肩胛部种植瘤的构建、小鼠不同比例肝脏切除模型的建立、小鼠肝脏种植瘤模型的构建在内的步骤。并对部分肝脏切术后接种瘤组织块，接种后每天经腹腔注射Hh信号抑制剂。本发明的方案表面促进肝切除术后肝再生的Hh信号通路同时也能促进肝种植瘤的生长，提示Hh信号通路可能成为防治肝癌复发和转移的新靶点，阻断Hh信号通路对肝癌复发的防治作用值得进一步研究，本发明的结果对肝癌切除术复发防治的研究具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及医药及疾病治疗技术领域，尤其涉及在部分肝脏切除术后促进小鼠肝种植瘤生长的方法。

背景技术

肝癌是全球第四种常见恶性肿瘤，第三种常见致死肿瘤。多学科综合治疗是目前倡导的最佳肝癌治疗模式。根治性肝癌切除术是肝功能储备正常的早中期肝癌的最佳治疗选择。但超过80％的接受肝癌根治术的病人在术后5年内复发，严重影响病人的长期生存率。肝癌根治性切除术后复发与肿瘤多中心生长和肝内微小癌栓密切相关。

当肿瘤细胞凋亡速率与增值速率平衡时，肿瘤微转移病灶会处于休眠状态。在肝癌根治性切除术尤其是大体积肝切除术后的肝再生过程中，肝脏将释放HGF、EGF、b-FGF 等生长因子，并发生细胞外基质结构的瓦解与重建。这些都可能激活休眠的微转移瘤或促进残留的多中心瘤灶生长和转移。此外,肝切除术后凝血因子链的激活、术后暂时性的全身或局部免疫抑制状态及上皮祖细胞及其它骨髓来源的肝祖细胞的活化，也可促进肿瘤的复发和转移。

Hedgehog(Hh)信号通路是动物发育过程中重要的细胞间通讯，它在胚胎发生过程中以组织特异的方式促进细胞的增殖和分化，决定胚胎模式的形成；在成体内，Hh信号通路调节许多组织器官干细胞的自我更新与增殖，维持正常的组织器官形态和功能。在组织器官受损伤时，Hh信号通路被激活可以促进组织干细胞的分化和增殖以修复损伤。然而，在成体组织和成熟器官中Hh信号通路的异常激活将导致多种肿瘤的发生，如肝癌、胃癌、结肠癌及肺癌等。

Hh信号通路由Hh配体、两个跨膜蛋白受体Patched(Ptch)和Smo以及下游转录因子Gli蛋白等组成。在哺乳动物中存在3种Hh配体:Shh、Ihh和Dhh。Ptch和Smo 是位于细胞膜上的跨膜蛋白，其中Ptch为Hh的受体，能与三种Hh配体结合。当不存在Hh配体蛋白时，Ptch抑制Smo的活性，进而抑制下游基因的转录表达。当Hh配体与Ptch结合时，Ptch对Smo的抑制效应被解除，激活下游的转录调节因子Gli，即可诱导目标基因如细胞周期蛋白、c-myc，VEGF等基因的表达。Hh信号通路促进肿瘤生长的发生有三种：第一种为Hh配体非依赖的自主途径，主要通过抑制PTCH1或者SUFU基因突变，或者激发Smo基因突变而激活Hh信号通路，这种方式见于基底细胞癌以及神经管细胞瘤^21,22。第二种是Hh配体依赖的自分泌途径，肿瘤细胞分泌Hh配体作用于自身，激活Hh信号通路，从而促进肿瘤细胞增生。这种作用方式见于肺癌，前列腺癌，结肠癌等。^23,24第三种是Hh配体依赖的旁分泌途径，肿瘤细胞或者瘤周组织细胞分泌Hh 配体与基质细胞结合，促进肿瘤周围组织细胞Hh信号通路的表达，使其分泌促肿瘤生长因子，如VEGF，IGF等，从而促进肿瘤的生长。这种方式见于淋巴瘤和浆细胞瘤。²⁵在我们的研究中，在种植瘤周肝组织中检测到Hh信号通路相关蛋白Ihh和Gli-1，而肝种植瘤组织中未检测这两种蛋白。提示部分肝切除术后肝脏组织分泌了Ihh，激活了肝脏组织Hh信号通路，进而促进了下游Gli-1蛋白等促瘤生长相关细胞因子的表达，最终促进了种植瘤的生长。阻断肝组织Hh信号通路后，种植瘤生长得到了明显的抑制。对各组Hh信号下游目标基因之一VEGF的检测发现，30％和70％肝切除术组瘤周肝组织 VEGF的表达升高，而抑制Hh信号通路可抑制VEGF的表达。因此，我们推测小鼠部分肝脏切除术后被激活的Hh信号通路可能通过Hh配体依赖的旁分泌途径，促进VEGF的表达从而肝种植瘤的生长。此结论仍需进一步的实验来验证，更多的下游细胞因子的分泌还有待进一步检测。