[发明专利]一种UPLC-MS-MS快速筛查半枝莲不同产地差异性的方法

权利要求书

1.一种UPLC-MS-MS快速筛查半枝莲不同产地差异性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）收集待区分的不同产地、不同批次的半枝莲药材，将相同产地的不同批次半枝莲药材分为一组，将每组半枝莲药材制成半枝莲标准汤剂样品，粉碎，过60目筛，于-20℃下避光保存；

（2）取步骤（1）的半枝莲标准汤剂样品各0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50-80%乙醇25ml，称定重量，加热回流20-40分钟，放冷，再称定重量，用50-80%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，制得供试品溶液，随后进入UPLC-MS-MS系统进行分析，得到每个半枝莲标准汤剂样品对应的质谱数据；

（3）将步骤（2）采集的数据直接导入至Compound Discoverer2.1，然后进行数据分析，针对每个样品进行色谱峰提取和质谱信息表征；

（4）选择物质色谱峰数量最多的样品作为参照样品，采用动态规划计算法校正样品间的色谱峰漂移，对齐属于同一物质的色谱峰，然后利用最邻近聚类方法将保留时间较为接近的物质注册成为一个化合物，最终建立一个样品和色谱峰的注册图表；经过外标校正后，用于后续的分析；

（5）利用方差分析计算样品间差异性的物质，置信水平阈值设定为0.05，将置信水平小于0.05的物质视作差异性化合物，将所有差异性物质的质谱信息的原始文件直接导入到Compound Discoverer2.1库中进行匹配，确定物质结构，从而得到差异性物质；然后通过色谱的峰面积和出峰保留时间对应的准分子离子峰的质量数确定不同产地半枝莲的差异性。

2.根据权利要求1所述的一种UPLC-MS-MS快速筛查半枝莲不同产地差异性的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述半枝莲标准汤剂样品是通过如下方法得到的：

取半枝莲药材，加水煎煮两次，第一次投入已煮沸的10-15倍量水中，武火加热至沸，文火保持微沸15-30分钟，用350目筛网趁热过滤，滤液用冷水迅速冷却；第二次煎煮加8-12倍量水，武火加热至沸，文火保持微沸10-20分钟，用350目筛网趁热过滤，滤液用冷水迅速冷却，合并两次滤液，冷冻干燥，即得。

3.根据权利要求1所述的一种UPLC-MS-MS快速筛查半枝莲不同产地差异性的方法，其特征在于，步骤（2）具体为：将步骤（1）得到的所有半枝莲标准汤剂样品0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，配制成溶液，随后进入UPLC-MS-MS系统进行分析，得到每个半枝莲标准汤剂样品对应的质谱数据。

4.根据权利要求1所述的一种UPLC-MS-MS快速筛查半枝莲不同产地差异性的方法，其特

征在于，步骤（2）中，所述UPLC-MS-MS系统的分析条件为：

色谱条件：C18色谱柱，以0.2%甲酸-水为流动相A，色谱甲醇为流动相B，梯度洗脱如下表所示；流速：0.4ml/min；柱温为30℃；检测波长为335nm；理论板数按野黄芩苷峰计算应不低于1500；

质谱条件：

采用多反应监测MRM 扫描模式，电喷雾离子源ESI，负离子模式下采集；数据采集范围m/z100～1000；离 子 源 参 数:毛细管电压: 3 kV，离子源温度: 150 ℃ ，脱溶剂气温度:350 ℃ ，雾化气流速 60 L·h-1，脱溶剂气流速 600 L·h-1; 碰撞能量: 10～40 V；扫描时间：5.00 -35.00min；锥孔电压为25V；

野黄芩苷分析物的检测离子对：m/z 461.08/285.05、m/z461.08/194.04；扫描时间：5.00 -8.00min；驻留时间：0.005；锥孔电压：25V；碰撞能：40V；

芹菜素分析物的检测离子对：m/z 269.24/151.02、m/z269.24/117.05；扫描时间：7.00-12.00min；驻留时间：0.005；锥孔电压：25V；碰撞能：40V。