[发明专利]一种UPLC-MS-MS快速筛查半枝莲不同产地差异性的方法

说明书

本发明公开了一种UPLC‑MS‑MS快速筛查半枝莲不同产地差异性的方法，包括：（1）收集不同产地、不同批次的半枝莲药材，制成标准汤剂样品；（2）将样品进入UPLC‑MS‑MS系统进行分析，得到对应的质谱数据；（3）将原始采集的数据直接导入至Compound Discoverer2.1，进行数据分析；（4）采用动态规划计算法校正色谱峰漂移，对齐色谱峰，利用最邻近聚类方法将保留时间较为接近的物质注册成为一个化合物；（5）利用方差分析计算样品间差异性的物质，确定不同产地半枝莲的差异性。本发明将化合物质谱信息输出为原始文件，不需转换成其他格式，可直接导入至Compound Discoverer2.1库中搜索化合物，该方法能够实现快速锁定半枝莲样本中存在的差异性化合物，适用于大批量样本快速分析测定。

技术领域

本发明属于中药成分研究技术领域，具体涉及一种UPLC-MS-MS快速筛查半枝莲不同产地差异性的方法。

背景技术

半枝莲为唇形科植物半枝莲Scutellaria barbata D.Don 的干燥全草，主产于半枝莲主产河北、河南、山西、陕西、安徽等地。中药材的活性成分由于地域、气候、品种等因素的差别，即使由同一种中药材，也会存在活性成分的差异。因此，对不同产地的同种药材进行筛选，对于提升中药品质具有重要的实际意义。

目前，对中药材产地的鉴别方法主要有HPLC、IR、NIR、TLC等，这些方法中存在大量的假阳性和假阴性问题，导致利用这些方法进行分析时，可能漏掉重要的物质信息，进而导致所筛选出的差异性物质无法有效表征组别差异，对确定不同产地的同种中药材鉴别带来困难。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种快速、准确度高的UPLC-MS-MS快速筛查半枝莲不同产地差异性的方法。

本发明是通过以下技术方案实现：

一种UPLC-MS-MS快速筛查半枝莲不同产地差异性的方法，包括以下步骤：

（1）收集待区分的不同产地、不同批次的半枝莲药材，将相同产地的不同批次半枝莲药材分为一组，将每组半枝莲药材制成半枝莲标准汤剂样品，粉碎，过60目筛，于-20℃下避光保存；

（2）取步骤（1）的半枝莲标准汤剂样品各0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50-80%乙醇25ml，称定重量，加热回流20-40分钟，放冷，再称定重量，用50-80%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，制备得供试品溶液，随后进入UPLC-MS-MS系统进行分析，得到每个样品对应的质谱数据；

（3）将步骤（2）采集的数据导入至Compound Discoverer2.1，进行数据分析，针对每个样品进行色谱峰提取和质谱信息表征；

（4）选择物质色谱峰数量最多的样品作为参照样品，采用动态规划计算法校正样品间的色谱峰漂移，对齐属于同一物质的色谱峰，然后利用最邻近聚类方法将保留时间较为接近的物质注册成为一个化合物，最终建立一个样品和色谱峰的注册图表；经过外标校正后，用于后续的分析；

（5）利用方差分析计算样品间差异性的物质，置信水平阈值设定为0.05，将置信水平小于0.05的物质视作差异性化合物，将所有差异性物质的质谱信息的原始文件直接导入到Compound Discoverer2.1库中进行匹配，确定物质结构，从而得到差异性物质；然后通过色谱的峰面积和出峰保留时间对应的准分子离子峰的质量数确定不同产地半枝莲的差异性。

其中，步骤（1）的半枝莲标准汤剂样品是根据《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》中“标准汤剂制备”项指导原则要求制备的。本发明对半枝莲标准汤剂样品制备工艺中的最大影响因素浸泡方式进行考察，比较了冷水浸泡和沸水投料两种工艺方式，具体方法如下：

a、温水浸泡方法：