[发明专利]一种沙冬青的快繁方法

权利要求书

1.一种沙冬青的快繁方法，包括以下步骤：

1)将沙冬青无菌苗进行切割，得到茎段，将所述茎段在诱导愈伤培养基上进行诱导愈伤培养25～30d，得到愈伤组织；所述诱导愈伤培养基以改良B5培养基作为基本培养基，包括0.5～0.8mg/L的KT、0.15～0.2mg/L的2，4-D、25～30g/L的蔗糖和4.5g/L的琼脂，pH为5.8～6.0；

2)将所述步骤1)中的愈伤组织在不定芽分化培养基上进行分化培养35～42d，得到带有茎节的不定芽；所述不定芽分化培养基以改良B5培养基作为基本培养基，包括0.5～1.0mg/L的NAA、0.2～0.5mg/L的6-BA、25～30g/L的蔗糖和4.5g/L的琼脂，pH为5.8～6.0；

3)将所述步骤2)中带有茎节的不定芽在生根培养基上进行生根培养20～25d，得到沙冬青植株；所述生根培养基以改良B5培养基作为基本培养基，包括1.0～1.5mg/L的2，4-D、1000～1300mg/L蛋白胨、10～15g/L的蔗糖和4.5g/L的琼脂，pH为5.8～6.0；

所述改良B5培养基包括大量元素、微量元素、铁盐和有机成分；

所述大量元素包括：硝酸钾2000.00mg/L、氯化钙100.00mg/L、硫酸镁333.33mg/L、磷酸二氢钠100.00mg/L、硫酸铵89.30mg/L；

所述微量元素包括：硼酸3.00mg/L、硫酸锌2.00mg/L、碘化钾0.75mg/L、硫酸铜0.025mg/L、钼酸钠0.25mg/L、硫酸锰10.00mg/L、氯化钴0.025mg/L；

所述铁盐包括：乙二胺四乙酸二铁28.00mg/L；

所述有机成分包括：肌醇100.00mg/L、烟酸1.00mg/L、盐酸吡哆醇1.00mg/L、盐酸硫胺素10.00mg/L。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)无菌苗的制备方法包括以下步骤：

a)将沙冬青种子进行浸泡、消毒，得到消毒后的沙冬青种子；

b)将所述消毒后的沙冬青种子接种于无菌苗培养基进行无菌苗培养10～15d，得到无菌苗；所述无菌苗培养基以所述改良B5培养基作为基本培养基，包括25g/L的蔗糖和4.5g/L的琼脂，pH为5.8～6.0。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤a)所述浸泡的时间为8～12h。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤a)所述消毒的方法为：将浸泡后的沙冬青种子依次采用质量浓度为2％的次氯酸钠溶液浸泡5～10min，质量浓度为70％的乙醇溶液浸泡30～40s，质量浓度为0.08％的氯化汞溶液浸泡3～5min。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤b)所述无菌苗培养包括依次进行的暗培养和光照培养，暗培养的时间为1～2d，暗培养后进行光照培养，所述光照培养的条件为：温度24±2℃、光照强度为1500～1800lx、光照时间为12～15h/d 。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述诱导愈伤培养包括依次进行的暗培养和光照培养，暗培养的时间为3～5d，暗培养后进行光照培养，所述光照培养的条件为：温度24±2℃、光照强度1800～2000lx、光照时间12～15h/d。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述茎段的长度为0.4～0.6cm。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述分化培养的条件 为：24±2℃、光照强度1800～2000lx、光照时间12～15h/d。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)所述生根培养包括依次进行的暗培养和光照培养，暗培养的时间为3～5d，暗培养后进行光照培养，所述光照培养的条件为：温度25℃、光照强度2000～2500lx、光照时间14h/d。