[发明专利]一种真菌花色苷类红素及其发酵制备方法

说明书

本发明公开了一种真菌花色苷类红素及其发酵制备方法，属于天然产物开发技术领域，发酵制备方法采用黑附球菌LS10H为发酵菌体，以液体培养基进行发酵并采用乙醇水溶液浸提取的方法制备真菌花色苷类红素，并对提取的真菌花色苷类红素进行性能测试，测试表明提取真菌花色苷类红素易溶于水，对光照不敏感，真菌色素为一类花色苷色素，含有但不仅限于分子量分别为596.2、576.2、522.2和536.2的物质，本发明采用生物发酵制备的真菌花色苷类红素具有发酵工艺简单，色素产量高，发酵过程易于控制且不易染菌等特点。

技术领域

本发明属于天然产物技术领域，涉及微生物发酵技术领域，具体涉及一种真菌花色苷类红素及其发酵制备方法。

背景技术

合成色素由于致癌性等问题逐渐被限制或禁止在食品中使用，天然色素已被广泛应用于食品着色与动物和植物组织提取相比，利用微生物发酵制备天然色素具有经济、高效和不受地理、季节或气候影响等优势，是天然色素的重要来源之一。花色苷是植物体内花青素与各种单糖结合而形成的糖苷，广泛分布于鲜花、水果和蔬菜之中，花色苷类色素是一种水溶性的天然色素，具有安全、无毒的食品应用特点。此外，花色苷类色素在体内还具有抗氧化、清除自由基、抗肿瘤和调节免疫功能等生理作用。目前的花色苷类色素主要从天然的水果和花卉中提取，其生产受到自然作物的生长季节和储存等因素的制约。

随着技术的发展，微生物尤其是丝状真菌色素逐渐受到了广泛的关注，针对真菌色素的研究亦成为天然色素研究领域的热点问题，真菌，尤其是接合菌类（ascomycetous）和担子菌类（basidiomycetous）可以产生多种颜色范围广泛天然色素，黑附球菌属（Epicoccum Link）微生物是一类安全、不产生物毒素、具有良好应用前景的食品天然着色剂生产菌株，目前在附球菌属中发现的色素主要有类胡萝卜色素（Carotenoids）、黄柄曲菌素（Flavipin）、色满酮类（Chromanone）、聚酮类色素（Orevactaene）以及吡啶酮类色素（Epipyridone）等；黑附球菌是一种内生真菌，属半知菌纲，壳霉目，杯霉科，黑附球菌属，在自然界分布较广。在研究应用当中，黑附球菌及其孢子主要被应用于生物防治和天然色素的发酵生产，如中国专利申请号201110253331.2公开了一种黑附球菌DB3及其在过氧化物脱胶制备纺织用亚麻、大麻、黄麻或红麻纤维工艺中的应用，Yue-Zhong Shu等在1997年首次报道了黑附球菌可发酵产生一种新型的多烯（烃）聚酮类色素，但目前国内利用黑附球菌发酵产色素的专利还比较罕见。

发明内容

根据以上现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提出一种真菌花色苷类红素及其发酵制备方法，为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种真菌花色苷类红素发酵制备方法，具体步骤如下：

1）种子培养：将黑附球菌在PDA培养基中进行划线培养，培养3-4天后使用无菌水洗下菌丝体，制得菌丝体悬液，即为发酵用种子液；

2）发酵：取种子液接种于液态发酵培养基中，于28-32℃、180-220r/min条件下培养1-3d后，然后将发酵条件设为10-25℃、120-240r/min，继续培养2-5d；

3）乙醇提取色素：发酵结束后，离心分离菌体和发酵液，然后向湿菌体中加入浓度为50%-100%的乙醇溶液，混合均匀后，在20-40℃下浸取30-60min，离心除去菌体，得含乙醇提取液。

优选的，所述PDA培养基的组分为马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，去离子水1000mL，pH6.7-7.2。

优选的，所述液态发酵培养基的组分为葡萄糖10-30g/L，蛋白胨0.5-1.5g/L，NaCl0.5-1g/L，K₂HPO₄ 0.2-0.5g/L，MgSO₄ 0.3-0.6g/L，FeSO₄ 0.005-0.015g/L，pH3-7。