[发明专利]一种固定化纤维素酶的制备及其酶水解纤维素的方法

权利要求书

1.一种固定化纤维素酶的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：准确称取纤维素酶粉末溶于纯水中，使其浓度为2.5-12.5mg/ml，待用；

准确称取戊二醛配置成质量分数为1％戊二醛溶液，待用；

准确称取海藻酸钠和聚乙二醇加入pH为4.8的酸性缓冲溶液中，室温下混合均匀后，形成海藻酸钠-聚乙二醇溶液，待用；其中海藻酸钠与聚乙二醇的质量比为1:0.5～1:2.5，海藻酸钠溶液的质量分数为1.0-6.0％，聚乙二醇分子量为1000-6000；

准确量取上述海藻酸钠-聚乙二醇溶液，依次加入上述纤维素酶溶液和戊二醛溶液，混合均匀后，于150r/min振荡30min，之后于4℃静置反应4h；反应后混合液中海藻酸钠-聚乙二醇溶液：纤维素酶溶液：戊二醛溶液的体积比为5:1:(0.5～2.5)；将上述混合液逐滴加入至质量分数为0.5-4％的CaCl2溶液中，于30-80℃固定0.5-7.5h，过滤；更换新的CaCl2溶液后，0-6℃静置硬化1-3h；之后用NaCl溶液洗涤，滤纸吸干表面水分，4℃以下保存。

2.根据权利要求1所述的纤维素酶的固定化方法，其特征在于，所述的纤维素酶的酶液浓度为5mg/ml。

3.根据权利要求1所述的纤维素酶固定化的方法，其特征在于，所述的海藻酸钠-聚乙二醇溶于pH＝4.8缓冲溶液，配置成海藻酸钠-聚乙二醇溶液；其中海藻酸钠溶液质量分数为3.5％，聚乙二醇分子量为4000；海藻酸钠与聚乙二醇的质量比＝1:1.5。

4.根据权利要求1所述的纤维素酶固定化的方法，其特征在于，-CaCl2溶液质量分数为2％。

5.根据权利要求1所述的纤维素酶固定化的方法，其特征在于，所述的海藻酸钠-聚乙二醇、纤维素酶、戊二醛混合溶液逐滴加入至质量分数为2％的CaCl2溶液后，固定化反应条件为温度50℃，时间2.5h。

6.根据权利要求1所述的纤维素酶固定化的方法，其特征在于，海藻酸钠-聚乙二醇溶液：纤维素酶溶液：戊二醛溶液：CaCl2溶液的体积比为5:1:1.5:1。

7.固定化酶水解纤维素的方法：具体步骤如下：上述固定化方法制备的固定化纤维素酶用于水解纤维素，将纤维素加入缓冲溶液中，使得纤维素质量分数为3.0-17.0％，缓冲溶液pH为3.0-6.0；固定化纤维素酶加入上述的纤维素溶液中，投加量为每克纤维素0.5-4.0g；水解温度为40-60℃，在120-180r/min条件下水解12-72h。

8.根据权利要求7所述的固定化酶酶水解纤维素的方法，其特征在于，其中海藻酸钠-聚乙二醇固定化酶水解纤维素的固定化酶投加量为每克纤维素3.55g，纤维素质量分数为13.16％，pH＝5.11，水解温度60℃，在150r/min条件下水解48h。