[发明专利]用于测定转肽酶A活性的多肽探针对、测定转肽酶A活性的方法及二者的应用

权利要求书

1.一种用于测定转肽酶A活性的多肽探针对，其特征在于，所述多肽探针对包括第一多肽探针和第二多肽探针；

所述第一多肽探针和第二多肽探针分别包括反应区、互补区和染料结合区；

所述反应区用于参与转肽酶A介导的转肽反应，使所述第一多肽探针和第二多肽探针结合为嵌合多肽；所述互补区用于使所述嵌合多肽自组装成发夹结构；所述染料结合区用于结合染料；

所述第一多肽探针具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，所述第二多肽探针具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的多肽探针对，其特征在于，所述互补区为可形成发夹结构的多肽片段。

3.根据权利要求1所述的多肽探针对，其特征在于，所述第一多肽探针的反应区的氨基酸序列为LPATGG，所述第一多肽探针的互补区的氨基酸序列为PSQPTYPG，所述第一多肽探针的染料结合区的氨基酸序列为CC。

4.根据权利要求1所述的多肽探针对，其特征在于，所述第二多肽探针的反应区的氨基酸序列为GG，所述第二多肽探针的互补区的氨基酸序列为VEDLIRFYDNLQQYLNV，所述第二多肽探针的染料结合区的氨基酸序列为CC。

5.根据权利要求1-4任一项所述的多肽探针对，其特征在于，所述染料为FlAsH-EDT₂、ReAsH-EDT₂、F2FlAsH或F4FlAsH。

6.一种测定转肽酶A活性的方法，其特征在于，包括：

将权利要求1-5任一项所述的用于测定转肽酶A活性的多肽探针对与待测样本于转肽反应缓冲液中混合并孵育，得到反应产物，通过所述反应产物与双砷染料结合形成复合物的荧光水平来判定转肽酶A的活性；

所述转肽反应缓冲液中包含还原剂，所述还原剂为DTT；

所述转肽反应缓冲液包括：Tris·HCl 40-60mmol/L、NaCl 120-180mmol/L、CaCl₂ 1-10mmol/L和DTT 0.5-1.5mmol/L。

7.根据权利要求6所述的测定转肽酶A活性的方法，其特征在于，所述转肽反应缓冲液主要由如下组分组成：Tris·HCl 45-55mmol/L、NaCl 130-170mmol/L、CaCl₂ 2-7mmol/L和DTT 0.7-1.3mmol/L。

8.如权利要求1-5任一项所述的用于测定转肽酶A活性的多肽探针对或权利要求6-7任一项所述的测定转肽酶A活性的方法在测定革兰氏阳性菌的潜在致病能力中的应用。