[发明专利]IL7和IL21修饰的NK92细胞、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种工程化的NK细胞，其特征在于，所述的NK细胞具有以下特征：

(1) 含有外源的第一表达盒和第二表达盒，其中所述第一表达盒用于表达包含IL7的第一融合蛋白，所述第二表达盒用于表达包含IL21的第二融合蛋白；和

(2) 所述第一融合蛋白和第二融合蛋白定位于所述NK细胞的细胞膜上，并且所述第一融合蛋白的IL7区段和第二融合蛋白的IL21区段暴露在细胞膜外；

并且，所述NK细胞是NK92细胞或NK92MI细胞。

2.如权利要求1所述的NK细胞，其特征在于，所述第一融合蛋白的结构如下式I所示：

L1-I1-H1-F1-TM1-C1 (I)

式中，

各“-”独立地为连接肽或肽键

L1为无或信号肽序列；

I1为IL7；

H1为任选的铰链区；

F1为任选的Fc段；

TM1为跨膜结构域；

C1为无或胞内结构域。

3.如权利要求1所述的NK细胞，其特征在于，所述第二融合蛋白的结构如下式II所示：

L2-I2-H2-F2-TM2-C2 (II)

式中，

各“-”独立地为连接肽或肽键

L2为无或信号肽序列；

I2为IL21；

H2为任选的铰链区；

F2为任选的Fc段；

TM2为跨膜结构域；

C2为无或胞内结构域。

4.如权利要求2或3所述的NK细胞，其特征在于，所述信号肽为选自下组的蛋白的信号肽：GM-CSF、CD4、CD8、或其组合。

5.如权利要求2所述的NK细胞，其特征在于，所述IL7的氨基酸序列如SEQ ID NO.: 2所示。

6.如权利要求3所述的NK细胞，其特征在于，所述IL21的氨基酸序列如SEQ ID NO.: 3所示。

7.如权利要求2或3所述的NK细胞，其特征在于，所述铰链区为选自下组的蛋白的铰链区：IgG4、CD8、CD28、或其组合。

8.如权利要求2或3所述的NK细胞，其特征在于，所述铰链区的氨基酸序列如SEQ IDNO.: 4所示。

9.如权利要求2或3所述的NK细胞，其特征在于，所述铰链区的氨基酸序列还包括如SEQID NO.: 4所示的序列，并且SEQ ID NO.: 4中第10位的脯氨酸(P)替换为丝氨酸(S)。

10.如权利要求2或3所述的NK细胞，其特征在于，所述Fc段的氨基酸序列如SEQ IDNO.: 5所示。

11.如权利要求2或3所述的NK细胞，其特征在于，所述跨膜结构域为选自下组的蛋白的跨膜结构域：CD4、CD8、CD28、或其组合。

12.如权利要求2或3所述的NK细胞，其特征在于，所述跨膜结构域的氨基酸序列如SEQID NO.: 6所示。

13.如权利要求1所述的NK细胞，其特征在于，所述第一融合蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.: 7所示。

14.如权利要求1所述的NK细胞，其特征在于，所述第二融合蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.: 8所示。

15.如权利要求1所述的NK细胞，其特征在于，所述第一融合蛋白的核酸编码序列如SEQID NO.: 9所示。

16.如权利要求1所述的NK细胞，其特征在于，所述第二融合蛋白的核酸编码序列如SEQID NO.: 10所示。