[发明专利]IL7和IL21修饰的NK92细胞、制备方法及其应用

说明书

本发明提供一种IL7和IL21修饰的NK92细胞、制备方法及其应用。具体地，本发明提供的NK细胞可有效杀伤肿瘤细胞，其体外增殖能力明显增强，体外易于扩增，可高密度培养，杀伤能力很强，生产成本低，副作用小，没有移植物抗宿主反应的危险。并且，所述NK细胞能显著刺激T细胞的活化和增殖，相互协作共同杀伤肿瘤细胞，有效增强机体的免疫应答反应。同时所述NK细胞与T细胞相互之间无细胞毒性，也不影响各自对靶细胞的杀伤效果。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体地，本发明涉及IL7和IL21修饰的NK92细胞、制备方法及其应用。

背景技术

细胞免疫治疗是一种新兴的、具有显著疗效的肿瘤治疗模式，是一种自身免疫抗癌的新型治疗方法。它是运用生物技术和生物制剂对从病人体内采集的免疫细胞进行体外培养和扩增后回输到病人体内的方法，来激发、增强机体自身免疫功能，从而达到治疗肿瘤的目的。

近年来，NK细胞在过继性细胞免疫治疗中表现出极大的应用前景。相关临床试验表明，对于癌症晚期的病人注射具有较小的副作用。NK-92细胞系衍生自一位非霍奇金性淋巴瘤患者的外周血单核细胞，具有很强的细胞毒性能力。NK92MI是通过转染得到的源自NK-92的IL-2非依赖的NK细胞株，即在体外培养时不需要添加IL-2。NK92MI细胞作为一株肿瘤细胞，和其他肿瘤细胞一样可以在体外可无限增殖且不依赖IL2，但在NK92MI细胞的体外培养过程中仍存在一些问题，NK92MI细胞在体外的增殖能力不如其他悬浮生长的肿瘤细胞，且不可高密度培养。NK92MI细胞在正常生长状态下是抱团悬浮生长，但是密度不可高，一旦密度过高，细胞团就会散开。细胞团散开后细胞状态会越来越差，并且不可恢复。

因此，本领域迫切需要开发一种增值能力强、可高密度培养、并能更有效杀伤肿瘤细胞的工程化的NK细胞。

发明内容

本发明的目的是提供一种增值能力强、可高密度培养、并能更有效杀伤肿瘤细胞的工程化的NK细胞。

本发明的另一目的是提供一种可在细胞膜上表达IL7和/或IL21的工程化NK细胞。

本发明的第一方面，提供了一种工程化的NK细胞，所述的NK细胞具有以下特征：

(1)含有外源的第一表达盒和/或第二表达盒，其中所述第一表达盒用于表达包含IL7的第一融合蛋白，所述第二表达盒用于表达包含IL21的第二融合蛋白；和

(2)所述第一融合蛋白和第二融合蛋白定位于所述NK细胞的细胞膜上，并且所述第一融合蛋白的IL7区段(IL7元件)和第二融合蛋白的IL21区段(IL21元件)暴露在细胞膜外。

在另一优选例中，所述NK细胞具有以下特征：

(1)含有外源的第一表达盒和第二表达盒，其中所述第一表达盒用于表达包含IL7的第一融合蛋白，所述第二表达盒用于表达包含IL21的第二融合蛋白；和

(2)所述第一融合蛋白和第二融合蛋白定位于所述NK细胞的细胞膜上，并且所述第一融合蛋白的IL7区段(IL7元件)和第二融合蛋白的IL21区段(IL21元件)暴露在细胞膜外。

在另一优选例中，所述第一融合蛋白的结构如下式I所示：

L1-I1-H1-F1-TM1-C1 (I)

式中，

各“-”独立地为连接肽或肽键

L1为无或信号肽序列；

I1为IL7；

H1为任选的铰链区；

F1为任选的Fc段；

TM1为跨膜结构域；

C1为无或胞内结构域。