[发明专利]以水分子为催化反应基底的电信号标记物及传感方法

权利要求书

1.以水分子为催化反应基底的传感方法，所述的传感方法采用电信号标记物为多肽-铜离子络合物，所述的铜离子为二价铜离子，所述的多肽为DCH或CDH或ECH或CEH，其中D代表天冬氨酸，C代表半胱氨酸，H代表组氨酸，E代表谷氨酸，其特征在于：包括以下步骤：

A：识别探针/多肽-铜离子/纳米金复合物的制备，包括以下子步骤：

A1：纳米金粒子的合成；

采用前驱体为氯金酸，还原剂为柠檬酸钠，将氯金酸溶液加热至沸腾，然后快速加入柠檬酸钠溶液，继续加热沸腾30分钟，然后将溶液冷却到室温，即得到柠檬酸稳定的纳米金粒子溶液；

A2：识别探针/多肽/纳米金复合物的合成；

用移液枪取出A1得到的纳米金粒子溶液，然后加入包含识别探针的PBS溶液，PBS溶液浓度为2 mM, pH为7.0，静止12小时以上得到识别探针修饰的纳米金，再向反应溶液中加入多肽溶液，震荡混合12小时以上得到识别探针/多肽/纳米金复合物，将该反应产物离心分离，弃除上层未反应的识别探针和多肽，将所得沉淀物用二次水洗涤后，再用PBS溶液分散；

A3：识别探针/多肽-铜离子/纳米金复合物的合成;

向A2所得的分散液中加入含硫酸铜的PBS溶液，得到识别探针/多肽-铜离子/纳米金复合物，低温保存备用；

B：工作电极的制备；

B1：在金电极表面修饰捕获探针分子，将金电极浸泡在含有捕获探针的溶液中；

B2：采用6-巯基己醇封闭B1得到的电极上的未反应的金表面，将B1得到的电极在1 mM的6-巯基己醇溶液中浸泡， 再用乙醇和蒸馏水冲洗电极表面，晾干；

B3：检测目标物和识别探针/多肽-铜离子/纳米金复合物的捕获，将B2得到的电极在含检测目标物和识别探针/多肽-铜离子/纳米金复合物的PBS溶液中浸泡，再用蒸馏水冲洗干净电极表面，晾干；

C：将B3得到的电极采用循环伏安法进行电化学测试。

2.根据权利要求1所述的以水分子为催化反应基底的传感方法，其特征在于：步骤A3得到的识别探针/多肽-铜离子/纳米金复合物低温保存备用，所述的保存温度为4 ℃。

3.根据权利要求1所述的以水分子为催化反应基底的传感方法，其特征在于：步骤B1中的金电极直径为2 mm，捕获探针溶液中的捕获探针的浓度为2 µM，捕获探针溶液采用包含10 mM TCEP、1 mM EDTA和0.1 M NaCl的Tris缓冲溶液配制，Tris缓冲溶液的浓度为10 mM，pH为7.4。

4.根据权利要求1所述的以水分子为催化反应基底的传感方法，其特征在于：步骤B2中的6-巯基己醇用乙醇溶解，浓度为1 mM。

5.根据权利要求1所述的以水分子为催化反应基底的传感方法，其特征在于：步骤B3中的检测目标物用包含0.1 M NaCl的PBS缓冲溶液配置，PBS缓冲溶液的浓度为10 mM，pH为7.4；步骤C中电化学测试采用三电极体系，步骤B3制备得到的电极作为工作电极，饱和的Ag/AgCl电极为参比电极，Pt电极为辅助电极，电解质为0.2 M的PBS缓冲溶液，pH 7.4。