[发明专利]一种中性粒细胞型鼻息肉小鼠模型的建立方法

说明书

本发明提供了一种中性粒细胞型鼻息肉小鼠模型的建立方法，包括：将脂多糖(LPS)滴入小鼠鼻腔中。本发明通过苏木素伊红染色、高碘酸希夫反应、免疫组织化学、ELISA、嗅觉实验等多种检测方法和多个检测指标，充分证实了本发明提供的方法成功且可靠地建立了中性粒细胞型鼻息肉小鼠模型。该鼻息肉小鼠模型病理特征符合中性粒细胞鼻息肉患者的特征性症状和体征改变，即与人类中性粒细胞鼻息肉患者的病理过程相符，操作可控性好、稳定性佳，可用于研究中性粒细胞型鼻息肉的发生发展机制及防治措施。

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体涉及一种中性粒细胞型鼻息肉小鼠模型的建立方法以及LPS在中性粒细胞型鼻息肉小鼠模型的建立中的应用。

背景技术

鼻息肉是上呼吸道常见病和多发病之一，不仅严重影响了患者的生活质量，而且给家庭和社会带来了沉重的经济负担。鼻息肉根据主要的炎症细胞分为以酸性粒细胞为主和以中性粒细胞为主两种类型，两者具有不同免疫组织病理和临床特征。欧美等西方国家鼻息肉以前者为主，而亚洲鼻息肉患者则以后者为主。鼻息肉的病因不是很清楚，但是病毒、细菌、真菌、变应原等多种因素都发挥了一定的作用。虽然鼻内糖皮质激素的使用和功能性鼻内镜鼻窦手术的广泛开展，显著提高了鼻息肉的治愈率，但是仍然有约10％鼻息肉患者术后反复发作。因此，鼻息肉内在机制需要进一步研究。

由于人体实验的医学伦理学制约，动物模型成为研究慢性鼻窦炎和鼻息肉发生发展及探索防治措施的重要工具。由于小鼠和人的基因结构最为接近，造模成功后，可体现出鼻息肉的关键表型。有关小鼠慢性鼻窦炎动物模型的文献比较多，但是小鼠鼻息肉动物模型非常罕见，这显然不利于鼻息肉的病理生理机制的研究，并影响该病的防治策略的制订。Kim等利用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)联合葡萄球菌肠毒素首次成功建立了小鼠嗜酸性粒细胞型鼻息肉炎模型。但迄今为止，国内外还没有小鼠中性粒细胞型鼻息肉动物模型的报道，而恰恰相反，中国人等亚洲人则以中性粒细胞型鼻息肉为主，因此，建立符合中国人自身特征的鼻息肉动物模型是一种内在需求。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明旨在解决目前国内外缺乏一种安全可靠的中性粒细胞鼻息肉型小鼠动物模型的问题。本发明提供了一种中性粒细胞型鼻息肉小鼠模型的建立方法以及脂多糖在中性粒细胞型鼻息肉小鼠模型的建立方法中的应用。

根据本发明的一个方面，提供了一种中性粒细胞型鼻息肉小鼠模型的建立方法，包括：将脂多糖(LPS)滴入小鼠鼻腔中。

在上述建立方法中，小鼠为无特异性病原体(SPF)6-8周龄的体重为18-23克的C57BL/6J小鼠。

在上述建立方法中，小鼠鼻腔滴入LPS，每周三次，连续三个月。

在上述建立方法中，每次滴入的LPS的剂量为5μg LPS/10μl-10μg LPS/10μl。

在上述建立方法中，通过组织病理改变、鼻腔细胞因子变化、嗅觉功能指标改变来确定模型构建是否成功以及鉴别是否是中性粒细胞型鼻息肉。

在上述建立方法中，包括：(1)选择无特异性病原体(SPF)6-8周龄的体重为18-23克的C57BL/6J小鼠，小鼠分为正常对照组、低剂量模型组和高剂量模型组；(2)低剂量模型组和高剂量模型组小鼠分别鼻腔滴入LPS正常对照组用无菌生理盐水代替；(3)通过组织病理改变、鼻腔细胞因子变化、嗅觉功能指标改变来确定模型构建是否成功以及鉴别是否是中性粒细胞型鼻息肉。

在上述建立方法中，通过苏木素伊红染色、高碘酸希夫反应、MPO、OMP、CD68、TLR4免疫组织化学观察鼻黏膜组织病理学改变，用ELISA检测鼻腔灌洗液中细胞因子IFN-γ、TNF-a、IL-4、IL-6和IL-17的表达水平，用埋藏食物小球实验评估小鼠嗅觉功能。