[发明专利]一种蛋白质纯化方法在审
| 申请号： | 201711444953.7 | 申请日： | 2017-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN108047303A | 公开（公告）日： | 2018-05-18 |
| 发明（设计）人： | 葛峰;熊倩;杨明坤;张珈;洪斌;李俊峰;付帅;张书晨 | 申请（专利权）人： | 湖北普罗金科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/36 | 分类号： | C07K1/36;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/14 |
| 代理公司： | 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 | 代理人： | 董建林 |
| 地址： | 430075 湖北省武汉市东湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蛋白质 纯化 方法 | ||
1.一种蛋白质纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、一种新型固相萃取剂的制备方法，具体步骤为：
将碳纳米管分散液超声雾化，在N
S2、蛋白质富集脱盐处理
向蛋白溶液中加入固体氯化钠，磁力搅拌下充分溶解，上样于活化处理后的固相萃取柱，乙醇溶液淋洗，真空泵抽至尽干后用甲醇洗脱，收集洗脱液；
S3、离子交换层析
将上述洗脱液进行微孔过滤，进行离子交换层析，收集洗脱液100％时UV280下的吸收峰产物，并进行冻干浓缩；
S4、疏水层析
将冻干的离子交换层析产物重溶，然后用蛋白质纯化系统进行疏水层析，收取缓冲液百分比为20％时的UV280吸收峰产物。
2.根据权利要求1所述的一种蛋白质纯化方法，其特征在于，所述步骤S1得到的碳纳米管的粒径为50～100nm。
3.根据权利要求1所述的一种蛋白质纯化方法，其特征在于，所述步骤S2中加入固体氯化钠后蛋白溶液中氯化钠的质量分数为5～8％。
4.根据权利要求1所述的一种蛋白质纯化方法，其特征在于，所述步骤S2中洗脱液体积5～8ml，洗脱流速为0.5～0.6ml/min。
5.根据权利要求1所述的一种蛋白质纯化方法，其特征在于，步骤S3的离子交换层析的填料为Capto DEAE、DEAE Sepharose 6FF、ANX Sepharose 4FF中的一种，洗脱液为pH 7.4～8.0的三羟甲基氨基甲烷与盐酸的缓冲液和浓度为2.5～3M的NaCl，洗脱速度为0.8～1mL/min。
6.根据权利要求1所述的一种蛋白质纯化方法，其特征在于，步骤S4的蛋白质纯化系统为AKTA Primeplus蛋白质纯化系统；疏水层析采用HiPrep Butyl FF预装柱，洗脱液为pH7.2～7.4的三羟甲基氨基甲烷与盐酸的缓冲液和浓度为1.2～1.5M的硫酸铵，洗脱速度为0.8-1mL/min。
7.根据权利要求1所述的一种蛋白质纯化方法，其特征在于，所述步骤S3中过滤采用的滤膜孔径0.045～0.05μm。
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