[发明专利]一种蛋白质纯化方法

说明书

本发明公开一种蛋白质纯化方法，包括如下步骤：S1、固相萃取剂的制备：将碳纳米管分散液超声雾化、收集、干燥，得到碳纳米管固相萃取剂；S2、蛋白质富集脱盐处理：向蛋白溶液中加入固体氯化钠，搅拌溶解，上样于活化处理后的固相萃取柱，用甲醇洗脱，收集洗脱液；S3、将上述洗脱液进行微孔过滤，进行离子交换层析，收集洗脱液100％时UV280下的吸收峰产物，并进行冻干浓缩；S4、将冻干的离子交换层析产物重溶，然后用蛋白质纯化系统进行疏水层析，收取缓冲液百分比为20％时UV280吸收峰产物。该固相萃取剂制备工艺简单、成本低，比表面积大，能够方便、快捷的实现对目的蛋白的富集、脱盐处理，为蛋白质的纯化提供了一种经济快速的新方法，应用潜力巨大。

技术领域

本发明属于生化分析鉴定技术领域，特别涉及一种蛋白质纯化方法。

背景技术

碳纳米管(Carbon Nanotube,CNT)是一类新型的碳纳米材料，是一种由石墨烯片卷成的中空管状物，其具有优异的力学、热学及电学性质，如超高的比表面积，良好的导热性、超快的电荷迁移率，这些特性使它在化学分析方面拥有很大的应用价值，已经引起了科学家极大的兴趣，因此具有广阔的应用领域。碳纳米管具有π共轭结构，因此可与多环芳烃产生较强的亲和力，适合作为SPE填料，具有良好的萃取性能。

蛋白质是人体中一切组织及细胞的重要组成成分，是每一个生命体的物质基础。蛋白质是非常复杂的一种有机化合物，由氨基酸按照不同的比例组合而成，氨基酸组成蛋白质的方式不同，所以蛋白质的种类千变万化。生命体离不开蛋白质，对于蛋白质的研究可以让我们更好的了解生命。不纯的蛋白质对于蛋白质的结构以及功能的研究来说没有任何的意义，因此我们必须要对复杂的蛋白质混合物进行分离纯化。随着蛋白质的结构以及功能的研究受到越来越多的研究者的重视，需要大量的高纯蛋白质来支持科研人员的研究。

不论对于重组蛋白还是天然蛋白，层析方法都是非常可靠的分离纯化方法，对于现有蛋白质纯化方法来说，层析技术是应用最为广泛且纯化效率最好的方法。层析方法改变了以往蛋白质纯化耗时较长、不易实现自动化以及活性收率差等问题，已广泛应用于蛋白质等大分子的分离纯化过程。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术存在的问题，提供一种蛋白质纯化方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种蛋白质纯化方法，包括如下步骤：

S1、一种新型固相萃取剂的制备方法，具体步骤为：

将碳纳米管分散液超声雾化，在N2驱动下通过高温管式炉，收集，干燥，得到碳纳米管固相萃取剂；

S2、蛋白质富集脱盐处理

向蛋白溶液中加入固体氯化钠，磁力搅拌下充分溶解，上样于活化处理后的固相萃取柱，乙醇溶液淋洗，真空泵抽至尽干后用甲醇洗脱，收集洗脱液；

S3、离子交换层析

将上述洗脱液进行微孔过滤，进行离子交换层析，收集洗脱液100％时UV280下的吸收峰产物，并进行冻干浓缩；

S4、疏水层析

将冻干的离子交换层析产物重溶，然后用蛋白质纯化系统进行疏水层析，收取缓冲液百分比为20％时的UV280吸收峰产物。

优选的，所述的一种蛋白质纯化方法，所述步骤S1得到的碳纳米管的粒径为50～100nm。

优选的，所述的一种蛋白质纯化方法，所述步骤S2中加入固体氯化钠后蛋白溶液中氯化钠的质量分数为5～8％。

优选的，所述的一种蛋白质纯化方法，所述步骤S2中洗脱液体积5～8ml，洗脱流速为0.5～0.6ml/min。