[发明专利]一种核酸稳定的荧光银纳米团簇、制备方法及其在赭曲霉毒素检测的应用

说明书

本发明一种核酸稳定的荧光银纳米团簇、制备方法及其在赭曲霉毒素检测的应用，其方法为：设计两种类型的核酸稳定的银纳米团簇（AgNCs），连接在DNA稳定的AgNCs上的序列可以是毒素的适配体序列，当连接在DNA稳定的AgNCs上的序列为赭曲霉毒素（OTA）的适配体时，在OTA存在的条件下，OTA与DNA稳定的AgNCs一端的适配体结合的作用力大于单链DNA与WS₂之间的作用力，使得AgNCs从WS₂上脱离，进而恢复荧光。此外，当溶液中含有两种不同毒素的适配体连接发不同的光的DNA稳定的AgNCs时，同时加入两种检测目标物，可实现两种毒素的同时检测；该方法的选择性好，灵敏度高，成本低；其检测OTA和AFB1的检测下限分别为：0.5ng/mL、0.5ng/mL。

技术领域

本发明属于纳米复合材料研究领域，特别涉及一种利用特定的核酸序列为模板制备稳定的具有荧光的银纳米团簇复合材料的制备方法，这种材料结合二硫化钨类似于石墨烯的纳米二维层状结构的性质用于新型的对多种毒素同时检测的荧光型生物传感器，所述的核酸稳定的银纳米团簇可记作AgNCs。

背景技术

动物饲料和人食物中的霉菌毒素对动物和人体的健康有很大的危害，进而引发了全球人民对霉菌毒素检测的高度关注。赭曲霉毒素A和黄曲霉毒素B1是最为普遍的两种的霉菌毒素。这两种毒素在天然食物（如谷类、豆类、干果、咖啡等）中最为多见，毒性也最强。现有技术中，法定的检测赭曲霉毒素A的方法有薄层色谱分析荧光检测（TLC-FD）和高效液相色谱荧光分析法(HPLC-FD)。传统定量检测黄曲霉毒素B1的方法有色谱分析法、液相色谱-质谱法等。然而，这些方法需要高端的设备和复杂精细的操作方法。

近年来，又发展了酶联免疫吸附测定（ELISA）、电化学分析、表面等离子体共振（SPR)等方法用来检测食物中含有的赭曲霉毒素。尽管这些方法比较受欢迎，但这些方法都需要一个稳定的抗体来源，而且耗时还比较久、花费也比较高。

因此，发展一种简单快速、低消耗、灵敏度高的检测方法来检测食品中赭曲霉毒素A或黄曲霉毒素B1的含量已迫在眉睫。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种核酸稳定的荧光银纳米团簇的制备方法。

本发明的第二个目的是提供一种核酸稳定的荧光银纳米团簇。

本发明的第三个目的是提供一种基于所述的具有荧光的银纳米团簇复合材料在赭曲霉毒素检测的生物传感器的应用方法，该方法的选择性好，灵敏度高，成本低。

为实现本发明的第一个目的，本发明的技术方案是信号探针与硝酸银在缓冲液体系中混合，以硼氢化钠为催化剂，避光的条件下反应合成核酸稳定的荧光银纳米团簇，所述的信号探针为探针P5，

所述探针P5的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

进一步设置是信号探针的最终浓度为1.5μM。

本发明的第二个发明目的是提供一种如所述的制备方法所制备的核酸稳定的荧光银纳米团簇，所述的信号探针为探针P5，则该银纳米团簇的荧光波段为红外光波段。

实现本发明的第三个目的是提供一种核酸稳定的荧光银纳米团簇作为荧光探针分析食品中的毒素的方法，

（1）将所述的核酸稳定的荧光银纳米团簇在缓冲液体系下，加入二硫化钨、以及分别加入用于标定的多组浓度的毒素溶液，待反应完毕，分别检测反应后体系的荧光强度，获得该荧光强度与用于标定的多组毒素溶液对数之间在浓度检测区间的线性比例关系；

（2）将所述的核酸稳定的荧光银纳米团簇在缓冲液体系下，加入二硫化钨，以及加入待检测的毒素溶液，根据步骤（1）的线性比例关系确定待检测的毒素溶液的浓度。