[发明专利]一种基于过渡金属催化氧化还原荧光调控体系在生物蛋白标记物检测中的应用

说明书

本发明涉及一种基于过渡金属催化氧化还原荧光调控体系在生物蛋白标记物检测中的应用，属于有机金属催化及生物检测技术领域，为解决生物蛋白标记物检测体系存储不方便、容易受到外部条件影响、检测方法应用范围被限制等问题，本发明采取了以下技术方案：1)在载体上包被抗体A；2)加入被测抗原生物蛋白标记物；3)加入过渡金属催化剂修饰的标记抗体B；4)加入含有氧化还原荧光探针的氧化还原荧光检测液，过渡金属催化剂催化荧光探针分子产生荧光信号，通过检测检测液的荧光强度可实现对被测抗原生物蛋白标记物的定量检测。实现对检测样品的超快、灵敏检测，具有操作简便、检测快速、准确性好、成本低、灵敏度高的优点。

技术领域

本发明涉及有机金属催化及生物检测技术领域，具体地说，涉及过渡金属催化氧化还原荧光调控体系在生物蛋白标记物检测中的应用。

背景技术

生物蛋白标记物的检测被认为是各种疾病检测及诊断的基石，因此开发灵敏、稳定、准确、低价的蛋白标记物检测方法具有十分重要的意义。目前，关于疾病标记物的检测技术主要是利用了抗原抗体特异性结合的原理，其中最经典的方法是酶联免疫吸附法。该方法是基于抗原抗体的特异性结合并引入酶标抗体，最终通过检测酶催化反应的程度对抗原或抗体进行定量检测的方法。然而，在检测过程中使用酶标抗体作为催化放大系统，不仅储存不方便，而且酶的活性容易受到外部条件的影响。酶催化反应对实验条件的苛刻要求限制了这种检测方法的广泛应用。

发明内容

为解决上述生物蛋白标记物检测体系存储不方便、容易受到外部条件影响、检测方法应用范围被限制等问题，本发明提供一种基于过渡金属催化氧化还原荧光调控体系在生物蛋白标记物检测中的应用。

为实现上述目的，本发明采取了以下技术方案。

一种基于过渡金属催化氧化还原荧光调控体系在生物蛋白标记物检测中的应用。

包括以下步骤：1)在载体上包被能够与被测抗原生物蛋白标记物特异性结合的包被抗体A；2)加入被测抗原生物蛋白标记物，使被测抗原生物蛋白标记物与固定在载体上的包被抗体A特异性结合；3)加入过渡金属催化剂修饰的、能够与被测抗原生物蛋白标记物特异性结合的标记抗体B，使标记抗体B与被测抗原生物蛋白标记物特异性结合；4)加入含有氧化还原荧光探针的氧化还原荧光检测液，过渡金属催化剂催化荧光探针分子产生荧光信号，通过检测检测液的荧光强度可实现对被测抗原生物蛋白标记物的定量检测。

步骤1)所述载体为聚苯乙烯酶标板、磁珠；所用磁珠包含氨基磁珠、羧基磁珠、环氧磁珠、生物素链酶亲或素磁珠中的一种或二种以上，其中氨基磁珠或羧基磁珠负载蛋白前需首先采用戊二醛或水溶性的碳二亚胺缩合剂进行活化；包被抗体A通过化学吸附固定在载体上或通过化学反应连接在载体上后用牛血清白蛋白(BSA)封闭。

所述聚苯乙烯酶标板可采用96孔酶标板、48孔酶标板、384孔酶标板等不同孔数的酶标板，酶标板均包含可拆与不可拆两种型号，酶标板的颜色包含黑色、白色以及无色透明色。

步骤2)具体为：向步骤1)所得载体中加入待测抗原生物蛋白标记物溶液，在37℃条件下孵育1-3h。

步骤3)具体为：向步骤2)所得载体中加入过渡金属催化剂修饰的、能够与被测抗原生物蛋白标记物特异性结合的标记抗体B，在37℃条件下孵育1-3h。

步骤3)中所述过渡金属催化剂修饰的方法为：取过渡金属催化剂溶于10-100mM的磷酸缓冲溶液中，使过渡金属催化剂浓度为0.01-1.00mg/mL，调节pH为7.2-7.5，加入终浓度为0.5-2.0mg/mL的NHS，向上述体系中加入5mg·mL^-1标记抗体B，加入量为每10mL所述体系加入标记抗体B1-5μL，摇床混合12-24h；向所得体系中分别加入1-5％(v/v)的牛血清白蛋白(BSA)和1-5％(v/v)的甲酸，每10mL所述体系二者加入量均为200μL，25℃摇床上混合12h，得到过渡金属催化剂标记抗体溶液，置于4℃条件下保存备用。