[发明专利]一种磷虾多糖制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种磷虾多糖的制备方法，尤其是一种北极磷虾来源的具有调节脂质代谢的生物活性肽制备方法，属于海洋生物技术领域。

背景技术

据估计，北极海域的磷虾蕴藏量达五十亿吨以上。每年１２月到第二年５月，磷虾密集于北极海域产卵繁殖，这是捕捞的大好时机。近几年来，世界的捕鱼量约为七千万吨左右，如果人们每年在北极海域捕磷虾一千五百万吨，那就将等于世界捕鱼总量的一倍，因此人们把北极海域称为世界未来的食品库。磷虾资源量丰富，富含不饱和脂肪酸，多糖成分，对其利用有助于海洋生物医药领域进一步的发展。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种制备方法简单、可靠，具有较好调节脂质代谢活性的，能为北极磷虾的开发和利用提供理论依据的北极磷虾来源的具有调节脂质代谢的生物活性肽制备方法。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的，一种磷虾多糖制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：

a）酶解：取150-250质量份磷虾脱脂粉末，加入450-550质量份1M NaOH溶液蒸馏水，在40-50℃水浴下磁力搅拌1.5-2.5h；调节pH至6.8-7.2，加入6-14质量份木瓜蛋白酶，酶解2.5-3.5h；调节pH至9.5-10.5，在40-50℃的恒温水浴中加热，加入2-8质量份胰蛋白酶，酶解2.5-3.5h；

b）热水提取：调节pH至中性后，100℃的水浴下加热灭酶10-20min；静置后3000-4000 r/min下离心30-40min，离心后取上清液，浓缩至原体积的1/18-22，用95％的乙醇进行醇沉，离心，取沉淀物并在35-45℃下烘干；

c）冷冻干燥：将所得固体溶解对溶液用蒸馏水透析45-50h，截留分子量3500；浓缩后冷冻干燥，得多糖粗品。

作为优选：所述的制备方法包括如下步骤：a）酶解：取200质量份磷虾脱脂粉末，加入500质量份1M NaOH溶液蒸馏水，在45℃水浴下磁力搅拌2h；调节pH至7，加入10质量份木瓜蛋白酶，酶解3h；调节pH至10，在45℃的恒温水浴中加热，加入5质量份胰蛋白酶，酶解3h；

b）热水提取：调节pH至中性后，100℃的水浴下加热灭酶15min；静置后3500 r/min下离心35min，离心后取上清液，浓缩至原体积的1/20，用95％的乙醇进行醇沉，离心，取沉淀物并在40℃下烘干；

c）冷冻干燥：将所得固体溶解对溶液用蒸馏水透析48h，截留分子量3500；浓缩后冷冻干燥，得多糖粗品。

作为优选：本发明使用Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换色谱柱（2.6×50 cm）对多糖粗品进行梯度洗脱，确定分段洗脱适宜的NaCl浓度分别为0,0.1,0.25,0.5和0.75 mol/L，五个多糖组分分别命名为S0，S1，S2，S3和S4；将所得的各多糖组分透析，浓缩，冻干，S4即为所得组分。

本发明从北极磷虾中分离纯化制备得到1种富含氨基糖，糖醛酸和硫酸取代的杂多糖，体外活性显示具有较好的调节脂质代谢的活性。

本发明具有制备方法简单、可靠，具有较好调节脂质代谢活性的，能为北极磷虾的开发和利用提供理论依据等特点。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明作详细的介绍：本发明所述的一种磷虾多糖制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：

a）酶解：取150-250质量份磷虾脱脂粉末，加入450-550质量份1M NaOH溶液蒸馏水，在40-50℃水浴下磁力搅拌1.5-2.5h；调节pH至6.8-7.2，加入6-14质量份木瓜蛋白酶，酶解2.5-3.5h；调节pH至9.5-10.5，在40-50℃的恒温水浴中加热，加入2-8质量份胰蛋白酶，酶解2.5-3.5h；

b）热水提取：调节pH至中性后，100℃的水浴下加热灭酶10-20min；静置后3000-4000 r/min下离心30-40min，离心后取上清液，浓缩至原体积的1/18-22，用95％的乙醇进行醇沉，离心，取沉淀物并在35-45℃下烘干；

c）冷冻干燥：将所得固体溶解对溶液用蒸馏水透析45-50h，截留分子量3500；浓缩后冷冻干燥，得多糖粗品。