[发明专利]一种免疫细胞冻存液及冻存方法

权利要求书

1.一种免疫细胞冻存液，其特征在于，包括基础培养基和添加成分，其中，添加成分包括以下终浓度的组分：海藻糖1-5g/mL、丙二醇3-6v/v％、乙酰胺3-5v/v％、右旋糖酐5-10v/v％、羟乙基淀粉1-3g/mL、葡萄糖0.5-1.5g/mL、肝素钠50-150U/mL、珍珠草提取液5-15mg/mL和卡介菌复合多糖0.5-1.5mg/mL。

2.根据权利要求1所述的免疫细胞冻存液，其特征在于，所述添加成分包括以下终浓度的组分：海藻糖3g/mL、丙二醇3-6v/v％、乙酰胺4v/v％、右旋糖酐8v/v％、羟乙基淀粉2g/mL、葡萄糖1.0g/mL、肝素钠100U/mL、珍珠草提取液10mg/mL和卡介菌复合多糖0.8mg/mL。

3.根据权利要求1或2所述的免疫细胞冻存液，其特征在于，所述珍珠草提取物是这样获得的：取珍珠草，清洗干净后晾干，粉碎至80-100目，将粉末与无水乙醇以重量比为1-3:1混合，然后进行CO₂超临界萃取，最后离心除杂，得脂溶性萃取物，向萃取余物中加入6-8倍重量的蒸馏水，在90-95℃加热6-8h，然后过滤，浓缩，最后真空冷冻干燥得水溶性萃取物，合并两次萃取物得珍珠草提取物。

4.根据权利要求1或2所述的免疫细胞冻存液，其特征在于，所述卡介菌复合多糖通过以下方法制备得到：将卡介菌接种于苏通液体培养基培养至生长成暗橙色菌膜，然后煮沸2-3h，离心并收集提取液，向沉淀中加入2-3倍无菌水，再煮沸30-50min，离心，合并两次提取液，最后干燥，粉碎，得卡介菌复合多糖。

5.根据权利要求1所述的免疫细胞冻存液，其特征在于，所述基础培养基为DMEM/F12培养基。

6.根据权利要求1所述的免疫细胞冻存液，其特征在于，所述免疫细胞为T细胞、NK细胞、单个核细胞、DC细胞或CAR-T细胞。

7.采用权利要求1-6任一项所述的冻存液冻存免疫细胞的方法，其特征在于，包括：将免疫细胞加入冻存液中，然后将温度降至-20～-25℃冻存1-2h，然后以3℃/h的速率降温至-40～-45℃冻存1-3h，再以5℃/h的速率降温至-75～-80℃冻存2-4h，最后转移至液氮中保存。

8.根据权利要求7所述的冻存方法，其特征在于，免疫细胞的冻存密度为1-5×10⁶个/mL。

9.根据权利要求8所述的冻存方法，其特征在于，免疫细胞的冻存密度为3×10⁶个/mL。