[发明专利]一种抗人神经生长因子scFv抗体及制备方法有效
| 申请号： | 201711452295.6 | 申请日： | 2017-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN108059676B | 公开（公告）日： | 2020-07-31 |
| 发明（设计）人： | 张文宇;邹有土;阮卡;马燕玲;王明灶;陈星;章永垒;葛平辉 | 申请（专利权）人： | 未名生物医药有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/22 | 分类号： | C07K16/22;C12N15/13;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 厦门市精诚新创知识产权代理有限公司 35218 | 代理人： | 秦华 |
| 地址： | 361000 福建省厦*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 神经 生长因子 scfv 抗体 制备 方法 | ||
1.一种抗人神经生长因子scFv抗体，其特征在于，其至少具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的重链可变区、如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的轻链可变区和位于两者之间的连接肽。
2.如权利要求1所述抗人神经生长因子scFv抗体，其特征在于，所述重链可变区的编码DNA序列为SEQ ID NO:2所示；
所述轻链可变区的编码DNA序列为SEQ ID NO:4所示。
3.如权利要求1所述抗人神经生长因子scFv抗体，其特征在于，所述连接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。
4.如权利要求1所述抗人神经生长因子scFv抗体，其特征在于，所述连接肽的编码DNA序列如SEQ ID NO:6所示
5.如权利要求1所述抗人神经生长因子scFv抗体，其特征在于，所述抗人神经生长因子scFv抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。
6.如权利要求1所述抗人神经生长因子scFv抗体，其特征在于，所述抗人神经生长因子scFv抗体的编码核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示。
7.含有权利要求1-6任一项所述抗人神经生长因子scFv抗体的表达载体。
8.如权利要求7所述表达载体，其特征在于，所述表达载体为酵母表达载体。
9.含有权利要求8所述表达载体的宿主细胞。
10.一种权利要求1-6任一项所述抗人神经生长因子scFv抗体的制备方法，其特征在于，包括如下入步骤：
构建：构建SEQ ID NO:8序列，同时，在SEQ ID NO:6的5’端引入EcoRI酶切识别位点序列GAATTC，3’端引入NotI酶切识别位点GCGGCCGC，同时下游3’端带有终止密码子；最终构建得到SEQ ID NO:9序列；
酶切：分别双酶切SEQ ID NO:9和载体pPIC9K，并回收目的条带；
连接，转化并表达：连接上述酶切后的产物后转入毕赤酵母GS115，并诱导抗人神经生长因子scFv抗体的表达；
亲和层析纯化：将上述所得通过Protein L亲和层析得到抗人神经生长因子scFv抗体。
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