[发明专利]一种抗人神经生长因子scFv抗体及制备方法

说明书

本发明公开了一种抗人神经生长因子scFv抗体及制备方法。其至少具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的重链可变区、如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的轻链可变区和位于两者之间的连接肽。按照本发明的制备方法可获得纯度大于90％的抗人神经生长因子scFv抗体。该方法成本低廉，具有广阔的市场前景。制备获得的抗人神经生长因子scFv抗体经体外细胞生物学活性检测，具备高效的与人神经生长因子的结合能力(IC50为123ng/ml)。

技术领域

本发明涉及抗体领域，尤其涉及一种抗人神经生长因子scFv抗体及制备方法。

背景技术

抗人神经生长因子抗体可以阻断神经生长因子介导的疼痛传递通路，从而在神经性疼痛、骨折疼痛、骨关节炎、类风湿关节炎、痛风关节痛等疼痛性疾病方面具有广泛的治疗作用。抗人神经生长因子完整的抗体作为复杂的真核蛋白，其分子量高达150kD，糖基化修饰复杂，仅适合在CHO等哺乳动物细胞中表达，且表达量低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗人神经生长因子scFv抗体序列，同时还提供该抗体的高效表达方法。

为实现上述目的，本发明提供一种抗人神经生长因子scFv抗体，其特征在于，其至少具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的重链可变区、如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的轻链可变区和位于两者之间的连接肽。

进一步，所述重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO:2所示；

任选的，所述轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO:4所示。

进一步，所述连接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；优选的，所述连接肽的DNA序列如SEQ ID NO:6所示。

进一步，所述抗人神经生长因子scFv抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。

进一步，所述抗人神经生长因子scFv抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示。

本发明还提供所述抗人神经生长因子scFv抗体的表达载体。

进一步，所述表达载体为酵母表达载体。

本发明还提供所述表达载体的宿主细胞。

本发明还提供一种所述抗人神经生长因子scFv抗体的制备方法，其特征在于，包括如下入步骤：

构建：构建SEQ ID NO:8序列，同时，在SEQ ID NO:6的5’端引入EcoRI酶切识别位点序列GAATTC，3’端引入NotI酶切识别位点GCGGCCGC，同时下游3’端带有终止密码子；最终构建得到SEQ ID NO:9序列；

酶切：分别双酶切SEQ ID NO:9和载体pPIC9K，并回收目的条带；

连接，转化并表达：连接上述酶切后的产物后转入毕赤酵母GS115，并诱导抗人神经生长因子scFv抗体的表达；

亲和层析纯化：将上述所得通过Protein L亲和层析得到抗人神经生长因子scFv抗体。

进一步，所述构建SEQ ID NO:8序列为：

将三个已有的抗人神经生长因子重链与轻链的CDR区氨基酸序列分别整合进入人抗体的重链与轻链的scFV氨基酸骨架序列，并逆翻译成适于毕赤酵母表达的DNA序列，形成三个重链DNA序列模板和三个轻链DNA序列模板；