[发明专利]一种从混合物中分离天然序列神经生长因子的方法有效
申请号: | 201711452346.5 | 申请日: | 2017-12-28 |
公开(公告)号: | CN107973848B | 公开(公告)日: | 2020-10-16 |
发明(设计)人: | 张文宇;黄奋飞;陈振雄;马大壮;章永垒;陈星 | 申请(专利权)人: | 未名生物医药有限公司 |
主分类号: | C07K14/48 | 分类号: | C07K14/48;C07K1/18 |
代理公司: | 厦门市精诚新创知识产权代理有限公司 35218 | 代理人: | 秦华 |
地址: | 361000 福建省厦*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 混合物 分离 天然 序列 神经 生长因子 方法 | ||
1.一种从混合物中分离天然序列神经生长因子的方法,该混合物为含有人神经生长因子的溶液,其特征在于,先采用强阳离子交换层析;再采用金属离子螯合层析对混合物进行分离纯化,最后采用高效强阳离子交换层析分离纯化得到天然神经生长因子;
其中,所述混合物为含有人神经生长因子的溶液为真核表达的人神经生长因子溶液,pH为6.5-8.5,盐浓度为0.1M-1.0M;所述溶液为发酵液上清;溶液中含有多聚体及不正确水解加工的变体;所述神经生长因子的序列为SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2;
所述金属离子螯合层析树脂由支持介质、螯合配基和金属离子组成;所述金属离子螯合于螯合配基上;螯合配基为含有3个配位位点的螯合物;所述金属离子为Zn2+;
所述分离纯化的洗脱条件为改变蛋白质与金属离子配位结合的竞争性物质浓度梯度;采用上升pH梯度和上升氯化铵浓度梯度;
分离纯化的平衡缓冲液的pH为7.5,盐浓度为0.1M;洗脱缓冲液pH值为8.5,洗脱缓冲液中的竞争剂浓度为1.5M;竞争剂为NH4+盐。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述强阳离子交换层析为,将所述混合物在pH5.5-6.5,电导低于15mS/cm的条件下加样至颗粒直径为40-90μm的强阳离子交换层析树脂上,用含0.6M NaCl,pH 5.5-6.5的缓冲液梯度洗脱。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述强阳离子交换层析树脂为SPSepharose FF。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述高效强阳离子交换层析为,将采用金属螯合层析所得样品在pH8.0-8.5,电导低于5mS/cm的条件下加样至颗粒直径为15-40μm的高效强阳离子交换层析树脂上,用含0.3M NaCl,pH8.0-8.5的缓冲液梯度洗脱;所述高效强阳离子交换层析树脂为SP Sepharose HP、Macro-Prep 25S Resin或Fractogel EMD SO3-(S)。
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