[发明专利]由WJMSC干细胞萃取具再生修复功效的胶原蛋白的方法

说明书

本发明是关于一种由瓦顿氏凝胶间叶干细胞(Wharton’s Jelly mesenchymal stem cells)萃取具再生修复功效的胶原蛋白的方法，包含：将WJMSC干细胞于第一培养液中培养16～24小时；移除第一培养液，并加入第二培养液培养36～48小时；收集细胞，并加入细胞裂解液，作用0.5～2小时，加入无机盐溶液以获得混合液，并于4℃作用24～48小时；离心混合液并收集沉淀物，并以保存溶液回溶沉淀物，以获得胶原蛋白。

技术领域

本发明是关于一种由瓦顿氏凝胶间叶干细胞(Wharton’s Jelly mesenchymalstem cells)萃取具再生修复功效的胶原蛋白的方法，尤其指一种利用特定培养方法促进细胞产生胶原蛋白并萃取的方法。

背景技术

胶原蛋白为一种具有伸张能力的蛋白质，存在于人体皮肤、骨骼、软骨、韧带、血管壁或结缔组织当中，此外胶原蛋白亦是使皮肤保持弹性的重要因子，若皮肤胶原蛋白流失会导致皮肤松弛甚至产生皱纹。目前胶原蛋白可以被应用于相当多的产业当中，包含美容保养产品或医药产品的制备。

目前胶原蛋白的来源主要为动物组织萃取，例如可由猪皮、鱼鳞，动物内脏等组织中萃取；中国台湾专利第TW I435881(B)号发明专利是一种自猪肺分离胶原蛋白的方法及应用，是以特定成分的萃取液与猪肺作用，再以胃蛋白酶进行水解，最后利用盐析法获得含猪肺胶原蛋白的材料；又中国台湾第TW I362393(B)号发明专利，为一种鱼鳞胶原蛋白胜肽产品的制作方法，包含分离鱼鳞与鱼皮，冷冻硬化处理鱼鳞并获得鱼鳞粉末，以酶水解后再以柑橘类果皮处理以降低萃取物的鱼腥味，以获得具有淡淡柑橘香味的胶原蛋白。但，动物来源的胶原蛋白除了具有腥味或苦味之外，亦可能引起过敏反应。

发明内容

本案发明人有鉴于现今胶原蛋白主要来自于动物，具有腥味以及诱发过敏的缺失，于是乃一本孜孜不倦的精神，并藉由其丰富专业知识及多年的实务经验所辅佐，而加以改善，并据此研创出本发明。

本发明是一种由瓦顿氏凝胶间叶干细胞(Wharton’s Jelly mesenchymal stemcells，简称WJMSC干细胞)萃取具再生修复功效的胶原蛋白的方法，包含：将WJMSC干细胞于第一培养液中培养16～24小时；移除第一培养液，并加入第二培养液培养36～48小时；收集细胞，并加入细胞裂解液，作用0.5～2小时，再加入无机盐溶液以获得混合液，并将混合液于4℃作用24～48小时；离心混合液并收集沉淀物，并以保存溶液回溶沉淀物，以获得胶原蛋白。

于本发明的一实施例中，第一培养液中含有人类碱性纤维母细胞生长因子(humanbasic fibroblast growth factor)。

于本发明的一实施例中，第一培养液中含有2～8ng/mL的人类碱性纤维母细胞生长因子。

于本发明的一实施例中，第一培养液中含有4ng/mL的人类碱性纤维母细胞生长因子。

于本发明的一实施例中，第二培养液包含人类碱性纤维母细胞生长因子、脯氨酸(proline)与维生素C(ascorbic acid)其中至少之一。

于本发明的一实施例中，第二培养液包含2～8ng/mL的人类碱性纤维母细胞生长因子、0.2～2mM的脯氨酸与5～50μM的维生素C其中至少之一。

于本发明的一实施例中，第二培养液包含4ng/mL的人类碱性纤维母细胞生长因子，0.2mM的脯氨酸与5～50μM的维生素C。

于本发明的一实施例中，无机盐溶液为硫酸铵(ammonium sulfate)溶液或是氯化钠(NaCl)溶液。

藉此，本案WJMSC干细胞萃取胶原蛋白的方法，提供一种简易且能大量制备胶原蛋白的方法。

附图说明

图1：氨基酸影响胶原蛋白表达分析图。