[发明专利]一种PPARs对巨噬细胞极化影响的研究方法在审
| 申请号： | 201711455786.6 | 申请日： | 2017-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN108085380A | 公开（公告）日： | 2018-05-29 |
| 发明（设计）人： | 陈雪玲;吴向未;陈聪哲 | 申请（专利权）人： | 陈雪玲 |
| 主分类号： | C12Q1/6876 | 分类号： | C12Q1/6876;G01N33/68;A61K49/00 |
| 代理公司： | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 | 代理人： | 董芙蓉 |
| 地址： | 832000 新疆维吾尔自治*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 巨噬细胞 极化 感染小鼠模型 细粒棘球蚴 表达水平 培养体系 包虫病 体外 研究 检测 | ||
1.一种PPARs对巨噬细胞极化影响的研究方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1.体外实验
1.1RAW264.7细胞与原头蚴共培养，检测PPARs表达水平及对巨噬细胞极化的调节
用RAW264.7细胞与原头蚴共培养，在12、24、36、48、72h分别收取细胞和上清，用qRT-PCR的方法检测PPAR-γ、PPAR-α以及巨噬细胞M1型相关因子TNF-α、MCP-1、IL-1β，M2型巨噬细胞相关因子Arg-1、TGF-β、Fizz-1的mRNA水平；ELISA方法检测MR和Arg-1的蛋白表达水平；
1.2小鼠腹腔巨噬细胞与原头蚴共培养，检测PPARs表达水平及对巨噬细胞极化的调节；
1.3小鼠腹腔巨噬细胞与原头蚴共培养，阻断PPARs通路，检测PPARs表达水平及对巨噬细胞极化的调节
实验组提前用PPARγ/α抑制剂处理腹腔巨噬细胞2小时，对照组加等量PBS，然后再与原头蚴共培养，48h收取细胞，重复上述实验；
步骤2.体内试验
2.1建立原头蚴感染小鼠动物模型，检测PPARs表达水平和对巨噬细胞极化的调节；
2.2建立原头蚴感染小鼠动物模型，阻断PPARs通路检测其对巨噬细胞极化的调节
在建立动物感染模型前实验组用PPARγ/α抑制剂处理小鼠，对照组用等量PBS处理，24h后再建模，15天时处死小鼠收集细胞，重复上述实验。
2.根据权利要求1所述的PPARs对巨噬细胞极化影响的研究方法，其特征在于，步骤1中，1.2小鼠腹腔巨噬细胞与原头蚴共培养，检测PPARs表达水平及对巨噬细胞极化的调节具体为：
提取小鼠腹腔巨噬细胞与原头蚴共培养，在12、24、36、48h分别收取细胞，用qRT-PCR的方法检测PPAR-γ、PPAR-α以及巨噬细胞M1型相关因子TNF-α、MCP-1、IL-1β，M2型巨噬细胞相关因子Arg-1、TGF-β、Fizz-1的mRNA水平；Western Blot方法检测PPAR-γ、PPAR-α、IκB、iNOS和Arg-1的蛋白表达水平。
3.根据权利要求1所述的PPARs对巨噬细胞极化影响的研究方法，其特征在于，步骤2中，2.1建立原头蚴感染小鼠动物模型，检测PPARs表达水平和对巨噬细胞极化的调节，具体为：
建立原头蚴感染小鼠动物模型，BALB/c小鼠随机分组，实验组腹腔接种原头蚴，对照组腹腔接种等量PBS；分别于第1、5、10、15天处死小鼠，收集血清和腹腔巨噬细胞；用qRT-PCR的方法检测PPAR-γ、PPAR-α以及巨噬细胞M1型相关因子TNF-α、MCP-1、IL-1β，M2型巨噬细胞相关因子Arg-1、TGF-β、Fizz-1的mRNA水平；Western Blot方法检测PPAR-γ、PPAR-α、IκB、iNOS和Arg-1的蛋白表达水平；ELISA方法检测MCP-1和Arg-1。
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