[发明专利]一种控制酒萸肉炮制工艺参数的指纹图谱建立方法

权利要求书

1.一种控制酒萸肉饮片炮制工艺参数的指纹图谱建立方法，包括如下步骤：

1)对照品溶液的制备：取没食子酸、原儿茶酸、5-羟甲基糠醛、马钱苷、莫诺苷适量置于容量瓶中，以乙醇或50～100％的甲醇溶解定容；

2)供试品溶液的制备：分别取炮制前的山茱萸药材和炮制过程中山茱萸饮片打粉(过三号筛)，精密称取适量，精密量取乙醇或50％～65％甲醇，称定重量，回流或超声，冷却后以同种溶剂补足重量，摇匀，过0.45μm膜备用即可；

3)HPLC指纹图谱的建立：

分别吸取步骤1)和2)所得的对照品和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪进行含量检测：

其中，色谱条件为：色谱柱为反相色谱柱C₁₈，紫外检测器，检测波长为230nm～250nm，柱温为30℃～40℃，流动相为乙腈-0.05％～0.2％磷酸溶液，梯度洗脱；流速为1.0ml/min，分析时间为100min；所述梯度洗脱顺序表如下：

表1 梯度洗脱顺序表

4)以马钱苷为参照峰的标准指纹图谱的制定

吸取步骤2)所得的山茱萸对照品溶液和山茱萸供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪中，照高效液相色谱法测定，记录色谱图；依据所得的10～15批山茱萸药材的指纹图谱、10～15批山茱萸饮片的指纹图谱，制定山茱萸药材标准指纹图谱和饮片标准指纹图谱；其中所述标准指纹图谱具有14个特征峰，其中8号峰为马钱苷；

5)指纹图谱的质量控制

将山茱萸原药材与其分别对应的山茱萸饮片的指纹图谱与步骤4)制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识别所具有的共同吸收峰的数量，确定相似度。

2.根据权利要求书1所述的指纹图谱建立方法，其特征在于：所述步骤1)对照品溶液的制备，按照下述方法进行，分别称取没食子酸对照品15.03mg、原儿茶酸对照品10.31mg、5-羟甲基糠醛对照品10.12mg、马钱苷对照品5.78mg、莫诺苷对照品6.32mg，置于100ml容量瓶中，加乙醇或50～65％甲醇，超声溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液。

3.根据权利要求1所述的指纹图谱建立方法，其特征在于：所述步骤2)的供试品溶液的制备按照下面的方法进行；

分别取炮制前的山茱萸药材和炮制过程中山茱萸饮片(过三号筛)0.1～0.5g，精密量取乙醇或50％～65％甲醇20～50ml，称定重量，超声或回流45～90min，冷却后以甲醇补足重量，摇匀，过0.45μm膜备用即可。

4.根据权利要求1所述的指纹图谱建立方法，其特征在于所述步骤(3)中的色谱柱是柱长为250mm反相色谱柱，检测波长为240nm。

5.根据权利要求1所述的指纹图谱建立方法,其特征在于所述步骤3)中流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液。

6.根据权利要求1所述的指纹图谱建立方法,其特征在于所述步骤1)和2)中甲醇浓度为50％。

7.根据权利要求1-3中任一项权利要求所述的指纹图谱建立方法，其特征在于：所述步骤2)中超声处理时间为45分钟。