[发明专利]一种控制酒萸肉炮制工艺参数的指纹图谱建立方法

说明书

本发明公开了一种控制酒萸肉炮制工艺的指纹图谱建立方法：通过控制炮制过程中各炮制参数在指纹图谱中马钱苷、莫诺苷、没食子酸、原儿茶酸、5‑羟甲基糠醛五个成分的含量(峰面积)，从而控制酒萸肉的炮制工艺。以单因素方式考察了燀制时间、闷润时间、蒸制时间三个因素对于五个化学成分的炮制前后的影响，确认最佳燀制、闷润和蒸制时间。

技术领域

本发明涉及中药炮制技术领域，具体涉及一种控制山茱萸炮制工艺参数的指纹图谱建立方法。

背景技术

山茱萸为山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb.et Zucc.的干燥成熟果肉；最早收录于《神农本草经》。其酸、涩，微温，归肝肾经；具有补益肝肾，收敛固涩的功效。医圣张仲景以山茱萸为君药组制了“金匮肾气丸”；宋朝太医钱乙所著《小儿药证直诀》对肾气丸进行删减组方“地黄丸”中也包含了“山茱萸”，用以滋补肾阴，治疗小儿尿床等症。后逐渐用于肾虚、头晕耳鸣、腰膝酸软、消渴、遗精等症。

山茱萸目前为止已知的化学成分主要有：环烯醚萜苷类成分(如马钱苷、莫诺苷、山茱萸苷等)、黄酮类(槲皮素、异鼠李素、山奈酚等)、有机酸(没食子酸、熊果酸、齐墩果酸、原儿茶酸等)及鞣质类等成分。有文献报道环烯醚萜苷类成分是山茱萸含量最高的成分群，同时也是山茱萸的特征性成分，故而在山茱萸及酒萸肉的质量控制中具有指导作用；而在诸多文献报道中，5-羟甲基糠醛对人体横纹肌及内脏有损害,同时具有神经毒性,还能与人体蛋白结合产生积累中毒,常被作为葡萄糖输液中的有害物质加以含量控制；德国更是将其列为刺激性危险品。

山茱萸作为补益类药，尽量减少其毒副反应是传统炮制工艺的目的，因此，5-羟甲基糠醛成分的控制非常有必要。虽然山茱萸是按照药典规定的炮制通则0213进行酒蒸，但是具体参数却不确定，黄酒闷润的时间、酒蒸的时间对其有效成分(原儿茶酸、没食子酸、莫诺苷、马钱苷)及毒性成分(5-羟甲基糠醛)含量是否有影响，目前为止都没有明确的研究。

目前通过山茱萸指纹图谱的建立，利用五个指标性成分炮制前后指纹图谱峰面积的变化规律对其炮制工艺及其参数进行优选，有效控制山茱萸炮制中有效成分及控制性成分(5-羟甲基糠醛)领域尚无较好的研究。

发明内容

针对现有技术状况，本发明利用五个指标性成分炮制前后指纹图谱峰面积的变化规律对其炮制工艺参数进行优选，提供一种控制其炮制工艺参数的指纹图谱建立方法，实现有效控制山茱萸炮制中有效成分及控制性成分(5-羟甲基糠醛)。本发明的技术方案如下：

一种控制酒萸肉饮片炮制工艺参数的指纹图谱建立方法，包括如下步骤：

1)对照品溶液的制备：取没食子酸、原儿茶酸、5-羟甲基糠醛、马钱苷、莫诺苷适量置于容量瓶中，以乙醇或50～100％的甲醇溶解定容；

2)供试品溶液的制备：分别取炮制前的山茱萸药材和炮制过程中山茱萸饮片打粉(过三号筛)，精密称取适量，精密量取乙醇或50％～65％甲醇，称定重量，回流或超声，冷却后以同种溶剂补足重量，摇匀，过0.45μm膜备用即可；

3)HPLC指纹图谱的建立：

分别吸取步骤1)和2)所得的对照品和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪进行含量检测：

其中，色谱条件为：色谱柱为反相色谱柱C18，紫外检测器，检测波长为230～250nm，柱温为30～40℃，流动相为乙睛-0.05～0.2％磷酸溶液，梯度洗脱；流速为1.0ml/min，分析时间为100min；所述梯度洗脱顺序表如下：

表1 梯度洗脱顺序表

4)以马钱苷为参照峰的标准指纹图谱的制定