[发明专利]一种高效的外泌体分离方法

权利要求书

1.一种高效的外泌体分离方法，其特征在于，所述分离方法至少包括以下步骤：

(1)通过载体向目标细胞中导入带有标签的CD63，导入成功后培养12～36h，然后筛选出含有CD63的阳性克隆细胞，再继续培养阳性克隆细胞；

(2)离心前清洗细胞；对阳性克隆细胞进行离心，所述离心的条件为1000g离心5min，随后4℃12000g；离心30min离心后取上清液，并向离心后的上清液中加入缓冲液；

(3)向上清液中加入磁性体，所述磁性体上含有能够与CD63上的标签特异性结合的标记物，孵育；

(4)将上清液置于磁场中；

(5)去除上清液后加入缓冲液，加入分选柱，利用缓冲液洗脱分选柱上滞留的外泌体，并收集。

2.根据权利要求1所述的外泌体分离方法，其特征在于：所述标签选自Flag、His6、GST、MBP、His-MBP、HA中的任意一种或几种。

3.根据权利要求1所述的外泌体分离方法，其特征在于：所述步骤(3)中孵育的温度为2～5℃，时间15～20分钟。

4.根据权利要求1所述的外泌体分离方法，其特征在于：所述步骤(4)将上清液置于磁场中的同时离心，离心的条件为1500～4500r/min，时间5～20min。

5.根据权利要求1所述的外泌体分离方法，其特征在于，所述步骤(1)中CD63通过pCD63-3*Flag导入目标细胞，所述pCD63-3*Flag通过载体、CD63片段和3flag片段按1:3:3的摩尔比加入到HB-infusion无缝克隆试剂获得。

6.根据权利要求1所述的外泌体分离方法，其特征在于，所述步骤(1)中所述细胞培养基包括以下组分：

7.根据权利要求6所述外泌体的分离方法，其特征在于，所述氨基酸选自L-盐酸精氨酸、L-盐酸胱氨酸、甘氨酸、L-盐酸组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-盐酸赖氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸中的任意一种或几种。