[发明专利]一种绵羊脂肪前体细胞的分离方法

权利要求书

1.一种绵羊脂肪前体细胞的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将绵羊清洗干净并牵至无菌室中，再使用酒精清洗2-3次，然后将绵羊颈部处死，取出腹股沟脂肪组织5-12g，放入酒精中浸泡10-20s，再放入无菌硫化铅溶液中；

S2、取出脂肪组织并置入D-Hanks液中漂洗3-6次，去除结缔组织和血管，再清洗1-2次，置于无菌烧杯中；

S3、将S2中处理后的脂肪组织切碎，体积不大于1mm3，切碎后加入到恒温培养基中，加入0.07-0.08%的I型胶原酶，并将恒温培养基置于37℃的恒温培养箱中，控制培养箱内二氧化碳的浓度的5%；

S4、使S3中处理后的脂肪组织碎片消化1-2h，完全消化后加入相同体积的完全培养液，终止消化，再通筛网筛除杂质，得到消化后的液体；

S5、将S4中获取的液体置于离心管中，设定转速为2000-2200rpm，时间为6-8min，去除上层漂浮的脂肪细胞和上清液，再用完全培养液清洗2-3次后悬重沉淀；

S6、取4-8ml悬重液放到培养皿中，加入12-20ml的完全培养液，混合均匀并置于37℃的恒温培养箱中。

2.根据权利要求1所述的一种绵羊脂肪前体细胞的分离方法，其特征在于：S5中离心分离2-3次，且每次分离后均用完全培养液清洗2-3次。

3.据权利要求1所述的一种绵羊脂肪前体细胞的分离方法，其特征在于：S4中先通过200目的筛网筛选2-3次，再使用100目的筛网筛选1-2次。

4.根据权利要求1所述的一种绵羊脂肪前体细胞的分离方法，其特征在于：S2中将去除结缔组织和血管后的脂肪组织置于无菌烧杯中，使用无菌处理后封口玻璃盖住烧杯，再将烧杯放在37℃的恒温箱中。