[发明专利]一种绵羊脂肪前体细胞的分离方法

说明书

本发明公开了一种绵羊脂肪前体细胞的分离方法，通过对绵羊脂肪的清洗、消毒、清理、破碎、消化和离心分离等步骤，得到绵羊脂肪前体细胞，并储放在恒温培养箱中；本发明与常规分离技术相比，分离纯度高、不易污染、保留细胞原有的活力，而且分离费用低，分离后的最佳培养环境易于制造，保证分离后的细胞不分化，保证细胞体外增殖速度，促进了对干细胞研究的发展，适合推广使用。

技术领域

本发明属于细胞分离领域，更具体地说，尤其涉及一种绵羊脂肪前体细胞的分离方法。

背景技术

前体脂防细胞是一类具有增殖和向成热脂肪细胞分化的特异化的前体细胞，它的存在和作用持续于人和动物的一生。在20世纪60年代初，国外即有人开始从事脂肪细胞培养的研究工作。

对前体脂防细胞原代和传代培养主要使用的是体外分离系统。体外分离的前体脂肪细胞能够再现体内的生理过程，有助于研究者完整地认识脂肪组织产生和增生的全过程，并且可以直接观察各种因素对这个过程的调控，是研究脂肪细胞分化，脂肪生成、代谢以及肥胖等各种疾病发生机理的必备工具。

发明内容

本发明的目的在于提供一种绵羊脂肪前体细胞的分离方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种绵羊脂肪前体细胞的分离方法，包括如下步骤：

S1、将绵羊清洗干净并牵至无菌室中，再使用酒精清洗2-3次，然后将绵羊颈部处死，取出腹股沟脂肪组织5-12g，放入酒精中浸泡10-20s，再放入无菌硫化铅溶液中；

S2、取出脂肪组织并置入D-Hanks液中漂洗3-6次，去除结缔组织和血管，再清洗1-2次，置于无菌烧杯中；

S3、将S2中处理后的脂肪组织切碎，体积不大于1mm3，切碎后加入到恒温培养基中，加入0.07-0.08%的I型胶原酶，并将恒温培养基置于37℃的恒温培养箱中，控制培养箱内二氧化碳的浓度的5%；

S4、使S3中处理后的脂肪组织碎片消化1-2h，完全消化后加入相同体积的完全培养液，终止消化，再通筛网筛除杂质，得到消化后的液体；

S5、将S4中获取的液体置于离心管中，设定转速为2000-2200rpm，时间为6-8min，去除上层漂浮的脂肪细胞和上清液，再用完全培养液清洗2-3次后悬重沉淀；

S6、取4-8ml悬重液放到培养皿中，加入12-20ml的完全培养液，混合均匀并置于37℃的恒温培养箱中。

优选的，S5中离心分离2-3次，且每次分离后均用完全培养液清洗2-3次。

优选的，S4中先通过200目的筛网筛选2-3次，再使用100目的筛网筛选1-2次。

优选的，S2中将去除结缔组织和血管后的脂肪组织置于无菌烧杯中，使用无菌处理后封口玻璃盖住烧杯，再将烧杯放在37℃的恒温箱中。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明与常规分离技术相比，分离纯度高、不易污染、保留细胞原有的活力，而且分离费用低，分离后的最佳培养环境易于制造，保证分离后的细胞不分化，保证细胞体外增殖速度，促进了对干细胞研究的发展，适合推广使用。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

一种绵羊脂肪前体细胞的分离方法，包括如下步骤：