[发明专利]GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括：

a.包被有GluR3B肽段的ELISA酶标板，包被肽段工作浓度为20ug/ml；

b.包被有含1％BSA的PBS溶液的ELISA酶标板；

c.酶标二抗，为HRP标记的山羊抗人IgG；

d.标准蛋白，为GluR3B单克隆抗体；

e.包被缓冲液、封闭液、ELISA酶标板洗涤液、稀释液、显色液、终止液。

2.如权利要求1所述的GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述包被缓冲液pH为9.6，其制备方法：将0.16gNa₂CO₃与0.29g NaHCO₃用双蒸水溶解，然后定容至100mL。

3.如权利要求1所述的GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述封闭液的制备方法：将1gBSA溶解于PBS溶液，然后定容至100mL。

4.如权利要求1所述的GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述ELISA酶标板洗涤液的制备方法：取3.75g Na₂HPO₄·12H₂O、0.43g NaH₂PO₄·2H₂O及7.2g NaCl，使用双蒸水溶解后定容至1L。

5.如权利要求1所述的GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述显色液为ABTS过氧化物酶底物。

6.如权利要求1至5任一项所述的GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述终止液为2mol/l的硫酸溶液。

7.利用权利要求1至6任一项所述ELISA检测试剂盒对GluR3B抗体的含量进行检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)使用包被缓冲液将GluR3B肽段稀释成20ug/ml，在酶标板的每孔中加入100ul，封板后置于4℃孵育过夜，备用；在另一酶标板每孔加入封闭液，同样封板后置于4℃孵育过夜，备用；

(2)次日，甩去各孔中的液体，加入ELISA酶标板洗涤液300ul，洗涤3-5次，甩干，将封闭液以100ul/孔体积加样到两块酶标板上，室温孵育2小时，甩去各孔中的液体，加入ELISA酶标板洗涤液300ul，洗涤3-5次，甩干；

(3)将癫痫患者血清或脑脊液样本以100ul/孔体积加样到两块酶标板对应的孔上，标准蛋白经稀释液稀释成不同浓度梯度，以100ul/孔体积加样到两块酶标板对应的孔上，酶标板4℃保温过夜，次日，甩干，加入ELISA酶标板洗涤液300ul，洗涤3-5次，甩干；

(4)将酶标二抗用稀释液以1：1000的比例稀释，然后以100ul/孔体积加样到两块酶标板上，酶标板室温孵育2小时，甩去各孔中的液体，加入ELISA酶标板洗涤液300ul，洗涤3-5次，甩干；

(5)加入显色液，室温避光孵育10-20分钟，加入终止液终止反应，在酶标仪上405nm测定OD值。