[发明专利]GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明涉及一种GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，包括：包被有GluR3B肽段的ELISA酶标板、包被有含1％BSA的PBS溶液的ELISA酶标板、酶标二抗、标准蛋白、包被缓冲液、封闭液、ELISA酶标板洗涤液、稀释液、显色液、终止液。该检测试剂盒可用于对癫痫患者血清、脑脊液中GluR3B抗体的含量进行检测，检测方法操作方便，准确度高，灵敏度高，且检测时不需要复杂仪器，易于在科研院校和医疗机构中推广应用，可大规模检测临床标本，快速获得人GluR3B抗体相关的海量数据和信息，为癫痫患者认知功能障碍的诊断提供重要的临床参考价值。

技术领域

本发明涉及一种GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒及其检测方法，于免疫学和生物技术领域。

技术背景

癫痫是神经科常见病，现今约有5千万癫痫患者，约占世界人口的0.5-1％。癫痫患者往往合并有严重认知方面、行为方面的异常，如注意缺陷/多动(ADD，ADHD)，情绪障碍，学习和记忆的缺损，这些合并症可能较癫痫发作本身对癫痫患者生活质量的影响更大。因此，寻找癫痫患者认知功能障碍的生物标志物并进行干预对改善癫痫患者生活质量的意义重大。

目前，GluR3B抗体被发现存在于相当比例的不同类型的癫痫患者体内，因此怀疑它们对大脑有致病性的影响。进一步通过动物实验发现，在三种行为测试(旋杆实验，旷场实验和握力试验)中，小鼠产生高水平特异性和非特异性交叉反应的GluR3B抗体(由GluR3B肽免疫产生)会导致异常行为和运动障碍，而几组对照组(不产生抗体的小鼠或产生高水平的其他人为控制的抗体的小鼠，由人为控制的抗体免疫产生)，则不显示这样的异常。这说明，GluR3B抗体与癫痫患者所表现出来的精神/认知/行为异常是密切相关的。

由于GluR3B抗体可以结合神经元，具有独特的能力激活他们的抗原(各自的谷氨酸受体)，杀死神经细胞，因而造成多发性脑损伤和诱导神经和认知/情绪障碍，GluR3B抗体作为癫痫患者认知功能障碍的生物标志物，对于癫痫患者认知功能障碍的诊断有重大意义，因此，对于癫痫病，尤其是常规疗法无效顽固性癫痫病，以及大的脑外科手术之前都有必要检测GluR3B肽抗体，但目前，尚无文献报道GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，也没有针对癫痫患者血清中的GluR3B抗体含量提供一种准确、简便、灵敏度高的检测手段。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，其可用于对癫痫患者血清、脑脊液中GluR3B抗体的含量进行检测。

本发明的另一个目的还在于提供利用该ELISA检测试剂盒对GluR3B抗体的含量进行检测的方法，该方法操作简单方便，准确度高，灵敏度高。

为解决上述现有技术存在的问题，本发明采取的技术方案为：

一种GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，包括：

a.包被有GluR3B肽段的ELISA酶标板，所述的GluR3B肽段由上海强耀生物科技有限公司合成，序列为：NEYERFVPFSDQQISNDSSSSENR，包被肽段工作浓度为20ug/ml；

b.包被有含1％BSA的PBS溶液的ELISA酶标板；此酶标板为排除非特异性结合的抗体；

c.酶标二抗，为HRP标记的山羊抗人IgG；购自Jackson ImmunoResearch

d.标准蛋白，为GluR3B单克隆抗体；

e.包被缓冲液、封闭液、ELISA酶标板洗涤液、稀释液、显色液、终止液。

所述包被缓冲液pH为9.6，其制备方法：将0.16g Na₂CO₃与0.29g NaHCO₃用双蒸水溶解，然后定容至100mL。