[发明专利]一种抗家蚕BmSRC多克隆抗血清、制备方法及应用

权利要求书

1.一种抗家蚕BmSRC多克隆抗血清的制备方法，其特征在于，包括采用SEQ ID NO：1所示的抗原通过动物免疫获得所述抗家蚕BmSRC多克隆抗血清。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗原通过下述步骤制得：

（1） 提取家蚕总RNA并反转录得到cDNA；

（2） 根据SilkDB提供的SEQ ID NO：3所示预测目标基因序列和EST序列，设计如SEQ IDNO: 7-10所示的扩增引物，获得第一扩增产物；

所述第一扩增产物与第一连接载体连接后获得第一连接产物，转化第一感受态细胞，获得第一阳性克隆，对第一阳性克隆进行测序验证，测序获得的BmSRC全长编码基因序列如SEQ ID NO: 6所示；

（3）家蚕BmSRC的原核表达及蛋白纯化

选取BmSRC特异性片段，获得SEQ ID NO:1所示的序列，设计带有Hindlll和xhoI酶切位点的引物进行PCR扩增，获得第二扩增产物；

所述第二扩增产物与第二连接载体连接后获得第二连接产物，所述第二连接产物转化第二感受态细胞，进行蛋白诱导表达；

对诱导表达的蛋白进行纯化处理，得到所述抗原。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述带有Hindlll和xhoI酶切位点的引物序列为如SEQ ID NO:11-16所示的序列。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一连接载体为PMD19-T Simple载体，所述第一感受态细胞为Trans1-T1 Phage Resistant感受态细胞。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第二连接载体为pET32a原核表达载体，所述第二感受态细胞为Rosetta菌株感受态。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述蛋白诱导表达包括将诱导完成的菌体破碎后，对分别收集的上清液和沉淀进行SDS-PAGE电泳，其中，分离胶浓度和收缩胶浓度分别为10%和5%。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，家蚕BmSRC的原核表达及蛋白纯化中，所述PCR扩增反应条件为：94℃预变性2分钟，然后94℃变性30秒、55℃退火30秒、72℃延伸1分钟，循环25次，最后72℃延伸10分钟，得到的PCR产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定并回收。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，提取家蚕总RNA的方法为：取家蚕五龄三天幼虫获得组织器官，以及从四龄三天到上簇2天的血液，将所述血液和液氮研磨后的组织器官分别加入Trizol，并分别提取RNA。

9.权利要求2-8中任一项的制备方法制备的抗家蚕BmSRC多克隆抗血清。

10.权利要求2-8中任一项的制备方法制备的抗家蚕BmSRC多克隆抗血清在检测家蚕的BmSRC蛋白中的应用。