[发明专利]一种快速培育落叶冬青组培苗的方法

权利要求书

1.一种快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）取经常规消毒、接种方法获得的腋芽，进行初代培养，获得1.5~2.0cm的无菌芽；将无菌芽剪切转接入增殖培养基中，先培养产生少量丛生芽，然后以25d为继代周期，将带有5~6个小芽的芽丛再转接入增殖培养基中，获得大量的丛生芽；增殖培养基为：MS+0.5mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA+1.0mg/L CPPU，

或MS+0.1mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L CPPU +1.0mg/L GA，

或MS+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L CPPU；

2）将增殖培养后的落叶冬青丛芽转接入壮苗培养基中，培养25d后，丛芽继续增殖，且有效苗数量增加；壮苗培养基为：MS+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L6-BA+0.5 mg/L CPPU+ 1.0GA；

3）剪取3.0cm以上的壮芽接种到生根诱导培养基中，15~25d后开始生根，培养35~45d后，再生植株长至5.0~6.0cm以上，小苗健壮；生根培养基为：1/2MS+1.0 mg/L IBA+1.0 g/LAC，或1/2MS+0.1 mg/L IBA+1.0 g/L AC；

4）待生根的小苗长至5.0~6.0cm以上、根8~10条时，将小苗进行炼苗、驯化移栽，成活后获得组培苗。

2.根据权利要求1所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于：步骤1）中，无菌腋芽是经常规消毒法选取落叶冬青春季嫩稍，剪取1.0cm带芽茎段进行腋芽诱导培养20d，获得的1.5~2.0cm左右的无菌芽。

3.根据权利要求1所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于：步骤1）中，腋芽转接增殖方法为：在超净工作台上用长镊将带腋芽茎段取出，在无菌条件下用将1.5cm左右的腋芽剪下，接种在增殖培养基上。

4.根据权利要求1所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于：步骤1）中，丛芽转接方法为：在超净工作台上用长镊将丛生芽取出放置在经灭菌的滤纸上，在无菌条件下将丛生芽分割成带有5~6个小芽的芽丛，接种到增殖培养基上。

5.根据权利要求1所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于：步骤2）中，所述的壮苗培养方法为：将增殖后的丛生芽在超净工作台上用长镊取出放置在经灭菌的滤纸上，在无菌条件下将丛生芽分割成3~4cm3大小，接种到壮苗培养基上。

6.根据权利要求1所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于：步骤4）中，炼苗、驯化移栽为：炼苗时将封口膜打开，用带孔的双层塑料薄膜蒙闭，在室温下炼苗2~3d，然后将小苗从瓶中取出洗去根部培养基，移入装有珍珠岩：泥炭：蛭石=5:3:2基质的容器中，小苗上部用带孔透明的塑料薄膜遮盖，10d后去除；期间每隔2d补充一次水分，苗木成活后常规管理。

7.根据权利要求1所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于：在增殖、壮苗以及生根培养基中，均含3.0 %蔗糖、0.65%琼脂，pH5.8。

8.根据权利要求1所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于：在增殖、壮苗以及生根阶段，培养温度为25±2℃，光照时间14h/d，光照强度55 µmol·m–2·s–1。

9.根据权利要求1所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于：落叶冬青的品种为‘Winter Red’、‘Red Sprite’、‘Winter Gold’。