[发明专利]人类LMNA-NTRK1基因融合突变检测引物、探针及检测试剂盒在审
| 申请号： | 201711469992.2 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN108660193A | 公开（公告）日： | 2018-10-16 |
| 发明（设计）人： | 姜自锋;孙玉楼;翟红利 | 申请（专利权）人： | 烟台赛泽医学检验中心有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 264670 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 突变 检测引物 探针 检测试剂 融合基因 修饰 突变检测引物 荧光PCR检测 特异性识别 逆转录PCR 基因融合 探针序列 医学领域 灵敏度 试剂盒 检出 拷贝 质控 生物技术 融合 检测 | ||
1.用于检测人类LMNA-NTRK1基因融合突变的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的序列。
2.与权利要求1所述引物组合配合使用的特异性探针，其特征在于，所述特异性探针序列如SEQ ID NO:3所示，其5’端修饰有FAM或VIC，3’端修饰有NFQ-MGB。
3.用于检测人类LMNA-NTRK1基因融合突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1所述的引物组合。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，试剂盒还含有权利要求2所述的特异性探针。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，试剂盒还含有质控系统，所述质控系统包含质控引物和质控探针，质控引物的序列如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示，所述质控探针的序列如SEQ ID NO:6所示。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，试剂盒的质控探针的5’端修饰有FAM或VIC，3’端修饰有NFQ-MGB。
7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还含有阳性对照液和空白对照液，所述阳性对照液为含有LMNA-NTRK1的质粒DNA，所述空白对照为Tris-HCl缓冲液。
8.根据权利要求3-6任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR缓冲液，HotStart Taq酶和UNG酶。
9.一种根据权利要求8所述试剂盒的使用方法，方法包括以下步骤：
(1)提取检测样本中的RNA，检测样本包括新鲜病理组织、石蜡包埋组织或胸腔液；
(2)将提取的RNA逆转录为cDNA，以cDNA为模板进行实时荧光PCR扩增反应；
(3)根据荧光PCR扩增仪显示的Ct值判断检测结果：检测反应体系的FAM和VIC荧光强度，以FAM达到设定的阈值时所需要的循环次数Ct值作为阴阳性判定标准，Ct值大于等于38：阴性；Ct值小于38：阳性。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，试剂盒还包括PCR扩增反应的反应体系，其成分如下：
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