[发明专利]检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法

权利要求书

1.一种检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：它包括以下步骤：

(一)标准溶液的标定

首先将至少三种不同浓度的标准工作液15μL和285μL空白血清或血浆分别置于1.5ml离心管中混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为1000-2000rpm下涡旋混匀30s-1min后，加入含有20-40％体积乙腈的高氯酸溶液的沉淀剂300μL，其中高氯酸溶液的含水量为80-95％，并在转速为1200-2000rpm下涡旋混匀2-4min后，再以10000-15000rpm的转速下高速离心10-20min，得到上清液，分别取上述上清液200uL，用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述上清液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的丙戊酸色谱图，以上述至少三个标准溶液的丙戊酸峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有丙戊酸的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；

(a)标准工作液的配制：

精确称取丙戊酸标准品45mg置于1ml容量瓶，用含水量为0％-25％的甲醇溶液进行溶解，并定容于1ml，得到标准储备液A，其丙戊酸的浓度为38658mg/L，将标准储备液A用含水量为10％-40％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有100-10000μg/mL丙戊酸的范围内配置出各标准工作液，并在-80℃条件下保存；

(二)检测血液的离心

取待检测血液至少5ml，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆，上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；

(三)待测样品处理

(b)用移液枪移取步骤(二)的血清或血浆置于1.5ml的离心管中；

(c)用移液枪移取含有20-40％体积乙腈的高氯酸溶液的沉淀剂300μL加入步骤(b)的离心管中，其中高氯酸溶液的含水量为80-95％，然后以1200-2000rpm的转速下涡旋混合2-4min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心10-20min，得到上清液即为待测样品；

(四)待测样品的检测

移取步骤(c)待测样品200uL，使用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述待测的样品进行检测，得出上述待测样品的丙戊酸色谱图，将上述色谱图中的丙戊酸峰面积y代入上述步骤(一)的标准曲线方程中，通过计算得到待检测样品中目标物浓度x，即为待检测血液中的丙戊酸药物浓度。

2.如权利要求1所述的检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：在步骤(一)中使用七种不同浓度的标准工作液，七种不同浓度的标准工作液分别为含有400、800、1200、1600、2000、3000、4000μg/mL浓度的丙戊酸溶液。

3.如权利要求2所述的检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：所述沉淀剂是由1∶2的乙腈的高氯酸溶液组成沉淀剂，其中高氯酸溶液是以1∶10的高氯酸与水配制成的溶液。

4.如权利要求3所述的检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：在步骤(a)中的稀释液是由3∶7的水和甲醇组成的稀释液。

5.如权利要求4所述的检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪所使用的在线过滤器为SSI COL PRE-FILTER WATER 1/16 0.5M。

6.如权利要求4所述的检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪所使用的色谱柱为Agilent Extend-C18。

7.如权利要求4所述的检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪设置的柱温为35℃。

8.如权利要求4所述的检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪所使用流动相为含0.015％磷酸和10mmol/L磷酸二氢钠的乙腈-水，采用等度洗脱，进样量为30uL。