[发明专利]检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法在审
申请号: | 201711472255.8 | 申请日: | 2017-12-28 |
公开(公告)号: | CN108132312A | 公开(公告)日: | 2018-06-08 |
发明(设计)人: | 贾永娟;王超;邱天袆;倪君君;郑春梅 | 申请(专利权)人: | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74 |
代理公司: | 北京双收知识产权代理有限公司 11241 | 代理人: | 李云鹏 |
地址: | 101111 北京市大兴区经*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 丙戊酸 血液 检测 标准曲线方程 液相色谱分析 色谱分析仪 紫外检测器 使用液 标准溶液 定量结果 毒副反应 临床治疗 实验成本 实验基础 血液样品 标定 给药 拟合 血药 个性化 体内 监测 分析 | ||
本发明检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法是使用液相色谱分析仪和紫外检测器对标准溶液进行标定,拟合得到标准曲线方程为y=a*x+b,取待测血液样品,在该待检测血液经过处理后,同样使用液相色谱分析仪和紫外检测器对待测的样品进行检测,得到待测血液y值,将待测血液y代入标准曲线方程中,通过计算得到待检测血液中的丙戊酸药物浓度,该方法提高了定量结果的准确性,极大地缩短分析时间,使检测过程简便快速,实验成本降低,更利于在临床治疗中对患者体内的丙戊酸血药浓度进行监测,为丙戊酸的个性化给药、减少毒副反应的发生提供实验基础。
技术领域
本发明涉及精神类药物的临床血药浓度监测技术领域,尤其涉及一种检测血液中抗癫痫药物丙戊酸浓度的方法。
背景技术
丙戊酸钠是传统的广谱抗癫痫药物,对各类型癫痫均有效。其口服后通过胃肠道后,在血液中循环的活性化合物为丙戊酸。丙戊酸(Valproic acid,VPA),分子式为C8H16O2,具体化学结构如图1所示。丙戊酸的有效血药浓度为50-100mg/L,当血药浓度>100mg/L时,毒副作用增强。常见不良反应是胃肠道反应,少数患者出现肝毒性。VPA主要通过神经系统发挥其药理作用,由于VPA治疗窗较窄,体内代谢过程存在较大的个体差异,服药周期长,给药剂量和血药浓度相关性不稳定,而血药浓度与疗效及毒性反应相关,用药剂量不足与药物过量的临床症状相似,所以对其血药浓度的监测是调整剂量,减少不良反应的重要参考,在临床用药中具有重大意义。
目前常用的丙戊酸(钠)血药浓度的测定方法众多,各有优缺点,包括荧光偏振免疫分析法、酶放大免疫法、高效液相色谱法、气相色谱法、液相色谱串联质谱法等。荧光偏振免疫分析法灵敏度高,快速简便,但分析成本非常高,易受其他物质干扰。酶放大免疫法自动化程度高,样品用量少,但试剂盒稳定性较差,专属性较差,价格昂贵。液相色谱串联质谱法测定血药浓度具有灵敏度高、专属性强等优点,但成本较高,且对人员和环境的要求较高。高效液相色谱法定量准确,重现性好,且经济效益好,但目前的已知方法仍存在前处理复杂,提取效率低、分析时间较长等问题。
发明内容
针对上述技术问题,本发明目的是提供一种检测血液中丙戊酸药物浓度的方法,使丙戊酸血药浓度的测定快速准确,很大程度上缩短样品分析时间。
本发明采用的技术方案是:
本发明的一种检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法,其中:它包括以下步骤:
(一)标准溶液的标定
首先将至少三种不同浓度的标准工作液15μL和285μL空白血清或血浆分别置于1.5ml 离心管中混合制成至少三种标准溶液,上述标准溶液分别在转速为1000-2000rpm下涡旋混匀30s-1min后,加入含有20-40%体积乙腈的高氯酸溶液的沉淀剂300μL,其中高氯酸溶液的含水量为80-95%,并在转速为1200-2000rpm下涡旋混匀2-4min后,再以10000-15000rpm 的转速下高速离心10-20min,得到上清液,分别取上述上清液200uL,用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述上清液进行检测,得出上述至少三种标准溶液的丙戊酸色谱图,以上述至少三个标准溶液的丙戊酸峰面积作为标准曲线图的纵坐标y,以上述标准工作液中含有丙戊酸的浓度作为标准曲线图的横坐标x,将以上检测所得至少三组数据进行线性回归,拟合得到标准曲线方程为y=a*x+b,并且得出权重系数a和b;
(a)标准工作液的配制:
精确称取丙戊酸标准品45mg置于1ml容量瓶,用含水量为0%-25%的甲醇溶液进行溶解,并定容于1ml,得到标准储备液A,其丙戊酸的浓度为38658mg/L,将标准储备液A用含水量为10%-40%的甲醇溶液的稀释液进行稀释,分别在含有100-10000μg/mL丙戊酸的范围内配置出各标准工作液,并在-80℃条件下保存;
(二)检测血液的离心
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