[发明专利]检测血液中茶碱药物含量的液相色谱分析方法

说明书

本发明检测血液中茶碱药物浓度的方法是使用液相色谱分析仪器和DAD检测器对标准溶液进行标定，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，取待测血液样品，在该待检测血液经过处理后，同样使用液相色谱分析仪器和DAD检测器对待测的样品进行检测，得到待测血液y值，将待测血液y代入标准曲线方程中，通过计算得到待测血液样品中目标物相对浓度x，内标物工作液浓度是已知的，由此计算得到该样本中待检测血液中的茶碱药物浓度，该方法提高了定量结果的准确性，消除系统误差；缩短了样本处理时间，使检测过程简便快速，更利于在临床治疗中对患者体内的茶碱血药浓度进行监测，为茶碱的个性化给药、减少毒副反应的发生提供实验基础。

技术领域

本发明涉及精神类药物的临床血药浓度监测技术领域，尤其涉及一种检测血液中茶碱药物浓度的方法。

背景技术

茶碱(Theophylline)是黄嘌呤类抗支气管痉挛药，具有良好的平喘、抗炎作用，几十年来一直是治疗支气管哮喘等急、慢性肺部疾病的常用药物。茶碱分子式为C₇H₈N₄O₂，化学结构式如图1所示。茶碱的有效血药浓度为10-20μg/mL，低于10μg/mL疗效不显著，高于20μg/mL则易出现严重毒副作用。由于其个体差异较大，治疗剂量与中毒剂量较接近，安全范围较窄，剂量过大或给药速度太快，易引起严重毒性反应甚至死亡。因此要使血药浓度维持在有效水平，保证临床用药达到预期疗效，有必要进行茶碱血药浓度监测，以便制定合理的个体化给药方案。

目前测定茶碱血清或血浆或血浆浓度常采用的方法大致有紫外分光光度法、荧光偏振免疫分析法、化学发光酶免疫分析法、放射免疫法、高效液相色谱法、液相色谱法质谱联用法等。其中，紫外分光光度易受其他物质干扰，可能导致定量不准确，且所用样本量与试剂量均偏大；荧光偏振免疫分析法仪器及试药的价格较高，难以在中小医院推广使用；化学发光酶免疫分析法的定标有效期短，难以在实际临床应用中较好调控；液相色谱法质谱联用法分析成本高，对场地及人员要求较高。高效液相色谱法具有定量准确，重现性好，成本低等优点，但目前仍存在前处理操作较复杂，外标法定量易导致结果不够准确，分析时间较长等问题。

发明内容

针对上述技术问题，本发明目的是提供一种检测血液中茶碱药物浓度的方法，将内标法与高效液相色谱法相结合，使茶碱血药浓度的测定快速准确，并通过简化前处理步骤，缩短样品处理时间。

本发明采用的技术方案是：

本发明的检测血液中茶碱药物含量的液相色谱分析方法，其中：它包括以下步骤：

(一)标准溶液的标定

首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL分别与10μL内标工作液和90ul空白血清或空白血浆混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为1200-2000rpm下涡旋混匀30s-1min后，再分别加入含有甲醇的乙腈沉淀蛋白试剂300uL，并在转速为1200-2000rpm下涡旋混匀2-4min后，然后在10000-15000rpm的转速下高速离心，10-12min，得到至少三种标准溶液的上清液，使用液相色谱分析仪器和DAD检测器对上述标准溶液的上清液进行检测，得出上述至少三种标准工作液和内标色谱图，在上述标准工作液和内标色谱图中分别得到标准目标物峰面积与内标物峰面积，以上述至少三个标准目标物峰面积与内标物峰面积的比值作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液浓度与内标工作液浓度的比值即相对浓度为作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为茶碱溶液，所述内标工作液为可可碱溶液；

(a)标准工作液的配制：