[发明专利]一种快速检测食品中沙门氏菌的方法在审
| 申请号： | 201711478860.6 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN108203736A | 公开（公告）日： | 2018-06-26 |
| 发明（设计）人： | 孙永军;王湛;侯磊;朱可欣;杜心培 | 申请（专利权）人： | 北京工业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12R1/42 |
| 代理公司： | 北京思海天达知识产权代理有限公司 11203 | 代理人： | 张立改 |
| 地址： | 100124 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 沙门氏菌 快速检测食品 沙门氏菌inVA 检测引物 食品样品 缓冲蛋白胨 传统培养 检测结果 裂解细胞 取上清液 上游引物 生理盐水 食品检测 系统检测 下游引物 基因 煮沸 检出限 上清液 水中 增菌 检测 | ||
1.一种快速检测食品中沙门氏菌的方法，其特征在于，用PCR方法对待测食品样品中沙门氏菌的inVA基因进行检测，包括以下步骤：
(1)将待测食品样品加入缓冲蛋白胨水中增菌，然后用生理盐水洗菌后煮沸裂解细胞，离心取上清液；
(2)以步骤(1)中获得的上清液为PCR反应模板，并利用沙门氏菌inVA基因的检测引物进行PCR检测；
其中，沙门氏菌inVA基因的检测引物包括：上游引物inVAF即基因序列SEQ ID NO:1；下游引物inVAR即基因序列SEQ ID NO:2。
2.按照权利要求1所述的一种快速检测食品中沙门氏菌的方法，其特征在于，在步骤(1)中，将待测食品样品加入缓冲蛋白胨水中，在37℃下增菌18～24h，获得增菌液，将增菌液离心后获得沉淀，将沉淀用生理盐水洗两次后加入去离子水充分重悬，煮沸后，冷却，离心取上清液。
3.按照权利要求2所述的一种快速检测食品中沙门氏菌的方法，其特征在于，将增菌液离心为将增菌液在12000rpm离心10min；所述离心取上清液为12000rpm离心5min取上清液。
4.按照权利要求2所述的一种快速检测食品中沙门氏菌的方法，其特征在于，生理盐水为质量分数为0.85％的NaCl溶液；所述煮沸的时间为15min；所述增菌液与去离子水的体积比为10:1。
5.按照权利要求1所述的一种快速检测食品中沙门氏菌的方法，其特征在于，在步骤(2)中，PCR反应体系为20μL，包括2μL 10×PCR缓冲液、200μM dNTPs、1.5mM MgCl2、8pmol上游引物inVAF、8pmol下游引物inVAR、2μL PCR模板，用灭过菌的去离子水补至总体积20μL。
6.按照权利要求1所述的一种快速检测食品中沙门氏菌的方法，其特征在于，在步骤(2)中，反应条件为：94℃4min热变性；94℃40s，60℃40s，72℃1min，35个循环；72℃延伸10min。
7.按照权利要求1所述的一种快速检测食品中沙门氏菌的方法，其特征在于，在步骤(2)中，PCR基因检测后的产物用含有EB的琼脂糖凝胶电泳分析，有阳性条带的待测食品样品即为沙门氏菌感染的食品。
8.按照权利要求7所述的一种快速检测食品中沙门氏菌的方法，其特征在于，阳性条带的片段大小为825bp。
9.按照权利要求1所述的一种快速检测食品中沙门氏菌的方法，其特征在于，所述食品选自全脂奶粉、生牛肉和加工过的鸡肉。
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