[发明专利]一种快速检测食品中沙门氏菌的方法

说明书

一种快速检测食品中沙门氏菌的方法，涉及食品检测技术领域。用PCR方法对待测食品样品中沙门氏菌的inVA基因进行检测，包括以下步骤：将待测食品样品加入缓冲蛋白胨水中增菌，然后用生理盐水洗菌后煮沸裂解细胞，离心取上清液；以获得的上清液为PCR反应模板，并利用沙门氏菌inVA基因的检测引物进行PCR检测；其中，沙门氏菌inVA基因的检测引物为：上游引物inVAF：5’‑tcctccgctctgtctactta‑3’；下游引物inVAR：5’‑accgaaatattcattgacgtt‑3’。本发明方法的检测结果与传统培养方法和系统检测结果一致，检出限为100cfu/25g，准确性达100％。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，具体涉及一种快速检测食品中沙门氏菌的方法。

背景技术

沙门氏菌是主要食源性病原微生物之一，极易污染肉类、鱼类、禽肉类、奶类、蛋类食品。进出口食品检测的时限性要求非常强，否则将影响合同的履行，或降低货物的价值。特别是对于鲜活食品，如鲜活水产品、冰鲜鸡肉等，更要求缩短检测时间。采用传统培养方法检测沙门氏菌，需要多步增菌富集、分离、筛选和生化鉴定，必要时还需要血清学鉴定，一般为4～6天，费时费力。近年发展起来的PCR方法，能够大大缩短检测时间，且具有较高的特异性和敏感性，已显示出巨大的检测潜力。已经报道的用于检测沙门氏菌的靶基因包括inVA基因、16S RNA基因、SefA基因、hin/H2区域、arfA基因等。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种快速检测食品中沙门氏菌的方法，该方法的检测结果与传统培养方法和系统检测结果一致，检出限为100cfu/25g(甚至可达到1cfu/25g)，准确性达100％。

基于上述目的，本发明提供的一种快速检测食品中沙门氏菌的方法，用PCR方法对待测食品样品中沙门氏菌的inVA基因进行检测，包括以下步骤：

(1)将待测食品样品加入缓冲蛋白胨水中增菌，然后用生理盐水洗菌后煮沸裂解细胞，离心取上清液；

(2)以步骤(1)中获得的上清液为PCR反应模板，并利用沙门氏菌inVA基因的检测引物进行PCR检测；

其中，沙门氏菌inVA基因的检测引物包括：上游引物inVAF(即基因序列SEQ IDNO:1)：5’-tcctccgctctgtctactta-3’；下游引物inVAR(即基因序列SEQ ID NO:2)：5’-accgaaatattcattgacgtt-3’。

研究结果表明，以invA基因为目的基因检测沙门氏菌具有较高的特异性和准确性，因此，本发明选择invA基因作为检测沙门氏菌的目的基因。

在本发明中，优选的，在步骤(1)中，将待测食品样品加入缓冲蛋白胨水中，在37℃下增菌18～24h，获得增菌液，将增菌液离心后获得沉淀，将沉淀用生理盐水洗两次后加入去离子水充分重悬，煮沸后，冷却，离心取上清液。

在本发明中，优选的，上述将增菌液离心为将增菌液在12000rpm离心10min；所述离心取上清液为12000rpm离心5min取上清液。

在本发明中，优选的，所述生理盐水为质量分数为0.85％的NaCl溶液；所述煮沸的时间为15min；所述增菌液与所述去离子水的体积比为10:1。

在本发明中，优选的，在步骤(2)中，PCR反应体系为20μL，包括2μL 10×PCR缓冲液、200μM dNTPs、1.5mM MgCl₂、8pmol上游引物inVAF、8pmol下游引物inVAR、2μL PCR模板，用灭过菌的去离子水补至总体积20μL；

在本发明中，优选的，在步骤(2)中，反应条件为：94℃4min热变性；94℃40s，60℃40s，72℃1min，35个循环；72℃延伸10min。