[发明专利]皮肤细胞喷雾及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医用材料领域，尤其涉及一种应用于皮肤组织损伤修复领域的皮肤细胞喷雾及其制备方法。

背景技术

皮肤是人体最大，也是最重要的器官之一，烧烫伤治疗是临床外科手术最重要的领域之一。创面烧伤程度一般分四级：浅度、浅二度、深二度和三度，浅层皮肤缺损后，随着表皮细胞增殖、分化和迁移，皮肤得以再生修复。如果是深度(深二度和三度)烧伤患者，创面的修复常需要通过各种皮片移植手术才能完成。深度烧伤创面的修复目前主要采用“拆东墙补西墙”的自体皮片移植，如深度烧伤创面面积不大，供皮区较充足，可采用自体大张皮或网状皮移植，创面愈合后瘢痕增生较轻，外观和功能较理想。尽管该方法成功救治了许多大面积深度烧伤患者，但是也带来了诸多问题：一是：创面修复时间过长，增加了医疗费用，且在漫长的创面修复过程中常发生感染、器官功能不全等并发症，甚至危及生命；二是：由于缺乏真皮层，移植自体表皮后，即使病人能得到及时救治完成创面的封闭，但后期会出现瘢痕挛缩畸形和功能障碍，是一个目前亟待攻克的难题。

为了解决临床上治疗深度烧伤、瘢痕整形患者的需求，异体真皮和人工皮肤产品孕育而生。由于异体皮肤涉及病毒传染风险、伦理问题、社会观念、来源限制等多重因素，异体皮肤在临床使用中受到极大的限制，而且价格及其昂贵。人工皮肤替代物被用于深度烧伤真皮修复，并取得良好的治疗效果。目前市场上的人工皮肤有：等产品。然而仍然存在诸多问题。如移植成活率较低，制备周期长，不易储存运输，大面积组织工程皮肤制备技术尚未解决等问题尚未解决。

干细胞治疗技术是组织工程的一大飞跃，是生物材料与细胞协同作用修复缺损组织的一大进步。在治疗皮肤损伤方面，干细胞治疗法是一种完美治愈皮肤缺损的新兴手段，可以替代目前市场上的人工皮肤，并具有显著的优势。如干细胞通过分泌一些生物活性因子，诱导体内成纤维细胞和血管内皮细胞等修复细胞的迁移、浸入和增殖，可以永久性修复创面，尤其是瘢痕少、挛缩小、触感柔软、活动度好、无功能障碍。目前细胞治疗方法一般采用干细胞与生物材料支架协同作用治疗。目前支架主要有两大类：一类是人工合成的真皮支架，另一类是基因天然材料的人工真皮支架。然而此类方法对支架材料的性能具有较高的要求，如孔径，力学性能，材料的韧性，生物相容性等，并且具有手术操作复杂，活动度差，材料价格昂贵等缺陷。

发明内容

鉴于上述状况，本发明提供一种应用于皮肤组织损伤修复领域的皮肤细胞喷雾及其制备方法。

一种皮肤细胞喷雾的制备方法，其包括如下步骤：

A.配置营养液，所述营养液为乳酸盐溶液、细胞培养基混合溶液、生长因子中的两种或几种组合；

B.配置高分子悬液，所述高分子悬液中的高分子为透明质酸钠、胶原、明胶、硫酸软骨素、海藻酸钠、丝素蛋白、壳聚糖、多肽中的一种或几种组合；

C.制备混合细胞悬液，选取真皮干细胞、表皮干细胞、骨髓间充质干细胞、祖细胞、毛囊干细胞、造血干细胞、脂肪干细胞、角质细胞、成纤维母细胞、T细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、羊水间充质干细胞中的一种或者几种组合，置于培养皿中，加入细胞特定的培养基，制得所述混合细胞悬液；

D.制备皮肤细胞喷雾，将步骤A、B、C中所得的营养液、高分子悬液、混合细胞悬液中的一种或几种混合，制得所述皮肤细胞喷雾并置于喷雾装置内。

优选地，所述乳酸盐溶液由氯化钠、乳酸钠、氯化钙、氯化钾及注射用水组成，所述氯化钠的浓度为0.05-0.15mol/L，所述乳酸钠的浓度为0.02-0.03mol/L，所述氯化钙的浓度为0.001-0.002mol/L，所述氯化钾的浓度为0.001-0.005mol/L，所述乳酸盐溶液pH值为6.0-7.5。

优选地，所述细胞培养基混合溶液由选取DMEM细胞培养基、RPMI 1640细胞培养基、MEM细胞培养基、1640细胞培养基、DMEM/F12细胞培养基、IMDM细胞培养基、McCoy5A细胞培养基、KSFM细胞培养基中的一种或几种组合，再添加血清蛋白和青霉素/链霉素混合溶液，或生长因子中的一种或几种组合而获得，所述生长因子的浓度为0.5-10ng/mL。所述青霉素/链霉素混合溶液为双抗溶液。

优选地，所述生长因子由碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、转化生长因子、血小板衍生生长因子、血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、胰岛素生长因子中的一种或几种构成。