[发明专利]一种多能干细胞及其分化的T细胞和应用

说明书

本发明提供了一种多能干细胞及其分化的T细胞和应用，所述多能干细胞包含有Runx1和Hoxa9串联共表达载体。本发明将外源Runx1和Hoxa9共表达载体引入多能干细胞中，成功构建了诱导性共表达外源Runx1和Hoxa9的多能干细胞，所述多能干细胞定向分化为T谱系祖细胞，并将发育为T细胞。使用本发明的方法获得的多能干细胞来源的T细胞，不仅功能正常，而且没有致瘤风险。

技术领域

本发明属于医药生物工程技术领域，涉及一种多能干细胞及其分化的T细胞和应用。

背景技术

多能干细胞(pluripotent stem cells，PSCs)是一类具有无限增殖潜能、分化形成不同谱系细胞组织、易于进行基因修饰的细胞，是当前干细胞研究的热点。诱导患者自体来源的多能干细胞分化形成不同的组织，不但可以规避伦理争议，而且降低了免疫排斥风险，是再生医学领域的应用热点。CAR-T作为一种新兴的免疫细胞疗法，具有特异性强、癌细胞清除效率高的特点，受到了广泛的关注。目前CAR-T疗法的免疫细胞主要来源于患者自身T细胞，然而一部分患者(例如婴儿、肿瘤晚期免疫缺陷病人和重度化疗病人)无法提供有效剂量的T细胞，且费用昂贵，极大地限制了该疗法的应用。通过多能干细胞获得功能性T细胞，可以解决上述问题。

已有基础研究通过在人多能干细胞来源的生血内皮中表达转录因子ERG、HOXA5、HOXA9、HOXA10、LCOR、RUNX1和SPI1获得了具有多谱系造血重建能力的造血干组细胞(hematopoietic stem and progenitor cells，HSPCs)，移植后可以产生多个造血谱系细胞(包括T细胞)(R.Sugimura et al.Haematopoietic stem and progenitor cells fromhuman pluripotent stem cells.Nature,545,432-438(2017))，但上述研究需要使用多达七个转录因子进行干细胞诱导，操作复杂、稳定性差、效率较低。

还有研究报道称，在内皮细胞中表达转录因子FOSB、GFI1、RUNX1和SPI1可以获得具有部分谱系造血重建能力(无T细胞谱系造血重建能力)的人造血多能祖细胞(hematopoietic multipotent progenitors)和具有全谱系造血重建能力的小鼠造血干细胞(hematopoietic stem cell)(V.M.Sandler et al.Reprogramming human endothelialcells to haematopoietic cells requires vascular induction.Nature 511,213-318(2014)；R.Lis et al.Conversion of adult endothelium to immunocompetenthaematopoietic stem cells.Nature 545,439-445(2017))，然而上述研究存在内皮细胞取材不便、基因编辑困难、技术方法繁琐、T谱系产生效率低等问题。因此，需要一种简单的诱导多能干细胞获得单一T谱系细胞的方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种多能干细胞及其分化的T细胞和应用，得到的多能干细胞来源的T细胞不仅功能正常，而且没有致瘤风险。

第一方面，本发明提供了一种载体，所述载体包括Runx1和Hoxa9串联共表达。

本发明中，将Runx1和Hoxa9的cDNA序列串联表达于同一载体，用于感染宿主细胞，可以得到稳定表达Runx1和Hoxa9的宿主细胞，操作简便、效率较高，得到的宿主细胞具有分化为T细胞的能力。

第二方面，本发明提供了一种表达如第一方面所述载体的核酸。

第三方面，本发明提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如第一方面所述的载体；

优选地，所述宿主细胞为多能干细胞。