[发明专利]一种绿色饲料添加剂铜离子螯合肽的制备方法

权利要求书

1.一种绿色饲料添加剂铜离子螯合肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，

（1）鳀鱼多肽干粉的制备

原料预处理：将冰冻鳀鱼解冻后用清水清洗，均匀斩成肉糜；

制备鱼浆：将肉糜分散于蒸馏水中形成鱼浆，肉糜与蒸馏水的质量比为1∶2～5；

鳀鱼酶解：在鱼浆中加入磷酸缓冲液将PH值调控至6.5～7.5，然后在鱼浆中加入外源酶进行酶解，形成酶解液；

灭酶：待酶解反应结束，将酶解液放置沸水浴中加热至酶失活；

制备多肽干粉：将酶解液离心处理，取其上清液，将上清液浓缩干燥，获得多肽干粉；

（2）铜离子螯合肽的制备

配制肽液：将多肽干粉配制成肽液，然后加入稀盐酸和稀氢氧化钾将肽液PH值调节至6.8～7.5；

制备铜离子螯合肽：在肽液中加入可溶性铜液进行螯合反应，待螯合反应结束后加入无水乙醇，混匀，然后离心处理，将所得沉淀物即铜离子螯合肽进行浓缩干燥处理。

2.根据权利要求1所述的一种绿色饲料添加剂铜离子螯合肽的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的原料预处理的具体操作如下，将所需重量的冷冻鳀鱼放预冷间解冻至-5～0℃，再用清水清洗后，放入斩拌机切成肉糜，斩拌时间8～10min，确保斩拌均匀，无大块组织。

3.根据权利要求1所述的一种绿色饲料添加剂铜离子螯合肽的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的鳀鱼酶解的具体操作如下，将鱼浆加热至温度35～45℃，为保证酶解更充分将鱼浆放入数显恒温水浴振荡器内，然后加入磷酸缓冲液使PH值调控在6.5～7.5之间，然后将温度提升至45～55℃，加入占鱼浆质量0.2～0.4%的外源酶反应4～6h。

4.根据权利要求3所述的一种绿色饲料添加剂铜离子螯合肽的制备方法，其特征在于：所述的外源酶为胰酶。

5.根据权利要求1所述的一种绿色饲料添加剂铜离子螯合肽的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的酶解液在沸水浴中的加热时间为15～25min。

6.根据权利要求1所述的一种绿色饲料添加剂铜离子螯合肽的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的酶解液离心处理的转速为3500～4500rpm，持续时间为8～12min。

7.根据权利要求1所述的一种绿色饲料添加剂铜离子螯合肽的制备方法，其特征在于：步骤（2）中多肽干粉配制成肽液的浓度按氨基酸摩尔浓度计算，每克肽折算为6.69mmol氨基酸的肽液。

8.根据权利要求1所述的一种绿色饲料添加剂铜离子螯合肽的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述的制备铜离子螯合肽的具体操作如下，按照多肽干粉中肽N与无水硫酸铜质量比4:1的比例在肽液中加入可溶性铜液进行螯合反应，反应温度为40～50℃，反应时间为35～45min，反应结束后加入无水乙醇并混匀，在3500～4500rpm转速下离心8～12min，将所得沉淀物即铜离子螯合肽进行干燥处理。

9.根据权利要求1所述的一种绿色饲料添加剂铜离子螯合肽的制备方法，其特征在于：步骤（2）中多肽干粉配制成的肽液中蛋白肽分子量均在1000Da以下，其中在分子量分布在500Da的蛋白肽占比大于85%。