[发明专利]水溶液中微量透明质酸的泡沫分离方法

权利要求书

1.水溶液中微量透明质酸的泡沫分离方法，其特征在于包括以下步骤：

1)以天然表面活性剂椰子油皂苷作为起泡剂和捕集剂，确定泡沫分离采收HA的工艺条件；

2)单因素实验步骤，具体步骤如下：

(1)检查实验装置，确定无漏水、漏气的现象；

(2)配制待分离的HA溶液：配制不同浓度的HA溶液，加入表面活性剂，用6mol/L和1mol/L NaOH溶液、6mol/L和1mol/L HCl溶液调节溶液pH值；

(3)在泡沫分离装置的泡沫发生管中加入HA溶液，打开气路阀门，调节压力表和气路流量计，气泡由顶端流出，收集到烧杯中，残液由排液口排出到收集瓶中；

(4)收集结束后的样品封口，静置消泡，测量泡沫液体积及残液中的HA的浓度；

(5)根据所得数据计算回收率R与富集比E的值并作图；

(6)清洗分离柱，先用自来水充分洗净，再用蒸馏水冲洗数次、干燥；

3)正交试验步骤，具体方法如下：

在单因素试验的基础上，设计并进行正交试验，对实验结果进行直观和显著性分析，确定各因素对HA回收的影响程度，确定最佳工艺条件，进行验证试验，得到最佳收集率和富集比；所述正交试验的因素包括溶液pH值、空气流速mL/min、加液量mL、溶液CAPB浓度g/L；

4)分析方法如下：

(1)溶液HA分离效果评价指标

HA的提取效果采用富集比、收集率为评价指标，如下公式1、公式2所示；

收集率：R(％)＝C_fV_f/C₀V₀×100％ (公式1)

富集比：E＝C_f/C₀ (公式2)

其中，C₀、C_f为原料液、提取泡沫液中透明质酸的浓度；V_f、V₀分别为原料液、提取泡沫液的体积；

(2)溶液中HA的浓度的测定

试验采用改良CTAB浊度法测定溶液中的透明质酸的浓度，具体步骤如下：

a.配制浓度为2.5g/L的CTAB溶液：称取0.25g固态CTAB溶解于100mL0.5mol/L氢氧化钠溶液，每次使用时现配现用；

b.配制乙酸缓冲液：准确称取1.640g醋酸钠固体和0.8766g氯化钠固体，加蒸馏水溶解，转移至100mL容量瓶中，定容，配制成0.2mol/L醋酸钠，0.15mol/L氯化钠溶液，用乙酸调节pH至6.0；

c.绘制标准曲线：配制HA初始浓度为0-400mg/L的标准溶液，移液枪移取300μLHA溶液、700μL乙酸缓冲液和2mL 2.5g/L CTAB溶液；于室温下混合5min，用紫外分光光度计测其在400nm下的OD值；以HA终浓度为横坐标，OD₄₀₀nm为纵坐标绘制标准曲线，改良CTAB法的拟合曲线为y＝73.73x-0.4171，线性相关系数达到R²＝0.99299。