[发明专利]一种普利卡那肽的固相合成方法

说明书

本发明涉及医药领域产品普利卡那肽的合成方法。该方法采用固液相相合成方法合成普利卡那肽，经过裂解直接获得普利卡那肽粗品，经过纯化得到产品。本发明先采用液相合成法合成六肽片段，利用酶促法将六肽片段偶联至固相树脂上，利用固相树脂的假稀释效应在固相树脂上通过对Cys不同位置的保护基，直接完成两个二硫环的选择性合成，之后将其从树脂上切割下来，直接进行纯化。由于液相、固相同时开展合成，酶促合成大大提高了合成效率及合成收率，不仅极大的减少了废水、废有机溶剂、废气的产生，同时固液相合成大大降低了生产成本，提高了产品品质。

技术领域

本发明为多肽合成制备领域，特别涉及普利卡那肽的合成制备方法。

技术背景

普利卡那肽结构式如下：

H-Asn-Asp-Glu-Cys(1)-Glu-Leu-Cys(2)-Val-Asn-Val-Ala-Cys(1)-Thr-Gly-Cys(2)-Leu-OH-cyclic (4→12),(7→15)-bis(disulfide)

普利卡那肽由美国Synergy公司研发成功，并于2017年1月19日获得FDA的批准，该药是一种口服鸟苷酸环化酶C (GC-C)受体激动剂，可以在上消化道发挥作用以刺激分泌肠液，从而维持肠道功能正常。其氨基酸肽序为H-Asn-Asp-Glu-Cys(1)-Glu-Leu-Cys(2)-Val-Asn-Val-Ala-Cys(1)-Thr-Gly-Cys(2)-Leu-OH，其中序列的4号位与10号位，7号位与15号位分别形成两对二硫环。主要用于治疗便秘肠易激综合症(IBS-C)和慢性特发性便秘(CIC)，它是迄今第二个用于治疗便秘的口服多肽药物。当前关于该药物的合成专利不多，主要有深圳翰宇药业的CN201310209459.8和CN201310680490.X两个专利，以及南京工业大学的一个制备专利CN201510104385.0。深圳翰宇药业的两个专利分别采用不同的固液相合成策略，虽然都采用的不同的侧链保护剂，定向合成了两对二硫键，但是由于采用了最后液相环化的方法，合成反应液的浓度受到极大限制，会产生大量的废水，操作复杂麻烦，不适合产业化生产。南京工业大学采用了固相环化的方法，有所改进，但是纯固相合成，需要高倍数物料投入，产生大量原材料的浪费，原子利用率极差，反应时间相对较长。本发明收率基本与现有文献报道持平或略高于报道，但是总体时间成本，物料成本等大大降低，并且适用于工业化生产。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的普利卡那肽的固相合成方法，该方法合成效率高，物料成本大大降低，并且适用于工业化生产。

本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种普利卡那肽的固相合成方法，其特点是：先采用液相合成法合成六肽片段，利用酶促法将六肽片段偶联至固相树脂上，利用固相树脂的假稀释效应在固相树脂上通过对Cys不同位置的保护基，直接完成两个二硫环的选择性合成，之后将其从树脂上切割下来，直接进行纯化。

本发明所述的一种普利卡那肽的固相合成方法，其进一步优选的技术方案步骤是：

A、片段缩合成各类普利卡那肽中间体：

(1)R-Asn(R1)-Asp(R2)-Glu(R2)-Cys(R1)-Glu(R2)-Leu-Cys(R1)-Val-Asn(R1)-Val-Ala-

Cys(R1)-Thr(R4)-Gly-Cys(R1)-Leu-R3的合成；

（2）利用树脂的假稀释效应完成R-Asn(R1)-Asp(R2)-Glu(R2)-Cys(R1)-Glu(R2)-Leu-