[发明专利]一种分离黄酮类成分的方法及其应用

权利要求书

1.一种分离结构近似的黄酮类成分的方法，所述方法基于高效液相色谱法，所述结构近似的黄酮类成分包括紫云英苷、槲皮苷、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素和山柰酚；所述高效液相法的色谱条件为：

固定相：十八烷基硅烷键合硅胶；

流动相：流动相A为乙腈，流动相B为体积百分比0.1％磷酸水溶液，采用梯度洗脱：0-40min，7％～25％A,其余为B；40-60min，25％～50％A，其余为B；

流速：0.5～3.0mL/min；

检测波长：200～400nm；

柱温：25～35℃；

进样量：2～20μL。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流速为1.0～1.2mL/min。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述流速为1.0mL/min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测波长为360nm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述柱温为30℃。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述进样量为10μL。

7.权利要求1至6中任一项所述方法在检测柿叶提取物或其制剂中黄酮类成分中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述检测是指定性检测和/或定量检测。

9.根据权利要求2所述的应用，所述应用基于一测多评法，内标化合物选自槲皮素、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、杨梅素、山柰酚、紫云英苷中的一种。

10.一种基于一测多评法测定柿叶提取物或其制剂中黄酮类成分含量的方法，所述方法基于权利要求1至6中任一项所述的方法，内标化合物选自槲皮素、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、杨梅素、山柰酚、紫云英苷中的一种；包括以下步骤：

I.相对校正因子的建立，具体操作为：

I-1.系列混合对照品溶液的制备

分别精密称取包括所述内标化合物的黄酮类成分的对照品，置于容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，得到混合对照品储备液；分别精密吸取一系列不同体积的所述混合对照品储备液置于容量瓶中，甲醇稀释至刻度线，摇匀，即得系列混合对照品溶液，备用；

I-2.相对校正因子f_k/s的计算

取步骤I-1制备得到的系列混合对照品溶液各10μL，分别注入高效液相色谱仪，在如权利要求1至6中任一项中所述的色谱条件下进行测定，获得色谱图并进行峰面积积分，分别计算所述内标化合物对除内标化合物外的其它黄酮类成分的相对校正因子f_k/s，取平均值；

II.供试品溶液的制备：

取柿叶提取物或柿叶提取物制剂，精密称定，加入甲醇，超声提取，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

III.内标化合物标准溶液的制备：

取所述内标化合物，精密称定，加入置于容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得；

IV.测定

取步骤II制备得到的供试品溶液和步骤III制备的内标化合物标准溶液10μL，分别注入高效液相色谱，在所述色谱条件下进行测定，获得色谱图并进行峰面积积分，先用外标法计算出所述内标化合物在供试品中的含量，然后按公式(1)计算各黄酮类成分的含量，

W_s＝(W_k×A_s)/(f_k/s×A_k) (1)，

式中A_k为所述内标化合物的峰面积，W_k为所述内标化合物含量；A_s为被测组分s的峰面积，W_s为被测组分s的含量，f_k/s为被测组分相对内标化合物的相对校正因子，通过步骤I所述方法建立。