[发明专利]人凝血因子IX融合蛋白及其制备方法与用途

权利要求书

1.一种人凝血因子IX的融合蛋白，所述融合蛋白从N端至C端依次包含人凝血因子IX、柔性肽接头、至少1个人绒毛膜促性腺激素β亚基羧基末端肽刚性单元和延长半衰期部分；其中，所述延长半衰期部分选自人免疫球蛋白Fc段、白蛋白或转铁蛋白，

其中，所述柔性肽接头具有以(GS)a(GGS)b(GGGS)c(GGGGS)d循环单元组合形成的氨基酸序列通式，其中a，b，c和d是大于或等于0的整数，且a+b+c+d≥1；

和所述人绒毛膜促性腺激素β亚基的羧基末端肽刚性单元包含以下氨基酸序列：

(i)PRFQDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ；

(ii)SSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ；

(iii)SSSSKAPPPS；

(iv)SRLPGPSDTPILPQ。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白是糖基化的。

3.如权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白是通过在哺乳动物细胞中表达而糖基化的。

4.如权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白是通过在中国仓鼠卵巢细胞中表达而糖基化的。

5.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述人凝血因子IX的氨基酸序列如SEQID NO：1所示。

6.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述柔性肽接头优选自下组：

(i)GSGGGSGGGGSGGGGS；

(ii)GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS；

(iii)GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS；

(iv)GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS；

(v)GGGSGGGSGGGSGGGSGGGS。

7.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含1、2、3、4或5个人绒毛膜促性腺激素β亚基的羧基末端肽刚性单元。

8.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc段具有降低的ADCC效应和/或CDC效应，和/或与FcRn受体的结合亲和力增强。

9.如权利要求8所述的融合蛋白，其特征在于，所述Fc段选自：

(i)含有Leu234Val、Leu235Ala和Pro331Ser突变的人IgG1绞链区、CH2和CH3区域；

(ii)含有Pro331Ser突变的人IgG2绞链区、CH2和CH3区域；

(iii)含有Thr250Gln和Met428Leu突变的人IgG2绞链区、CH2和CH3区域；

(iv)含有Pro331Ser、Thr250Gln和Met428Leu突变的人IgG2绞链区、CH2和CH3区域；

(v)含有Ser228Pro和Leu235Ala突变的人IgG4绞链区、CH2和CH3区域。

10.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO：8所示。

11.如权利要求1-10中任一项所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的活性>200IU/mg。

12.编码如权利要求1-11中任一项所述的融合蛋白的DNA分子。

13.如权利要求12所述的DNA分子，所述DNA分子的序列如SEQ ID NO：9所示。

14.一种载体，其特征在于，包含如权利要求12或13所述的DNA分子。