[发明专利]人凝血因子IX融合蛋白及其制备方法与用途

说明书

本发明公开了一种高糖基化的重组人凝血因子IX(FIX)融合蛋白、其制备方法及用途。所述融合蛋白从N端到C端依次包含人FIX、柔性肽接头、至少1个人绒毛膜促性腺激素β亚基羧基末端肽刚性单元和延长半衰期部分。该融合蛋白具有与重组FIX类似的生物学活性及延长的体内活性半衰期，降低的免疫原性，从而改善药代动力学和药效。

技术领域

本发明涉及融合蛋白领域，更具体地，涉及一种人凝血因子IX(FIX)的融合蛋白及其制备方法和用途，特别是治疗多种凝血相关疾病的用途。

背景技术

血友病B是一种连锁隐性遗传病，其发病机制是位于X染色体上的人凝血因子IX(FIX)基因发生了突变，导致血浆中该凝血因子含量或活性大幅下降，从而使得内源性凝血途径受到阻碍，无法进行正常凝血。据估计我国血友病B患者总数约20000名，占血友病的15％-20％，血友病B在男性中的发病率为1/30000，而在女性中则非常罕见。目前最常用的治疗方式是FIX药物替代治疗，包括血浆富集来源FIX和重组细胞表达来源FIX。

人凝血因子IX(Factor IX，FIX)是一种丝氨酸蛋白酶的酶原，包含461个氨基酸，是凝血级联内源性途径的一个重要组分，主要在肝脏中合成并分泌至血浆中。FIX由多个分开的功能域组成，包括信号肽、前肽区、Gla结构域、两个类表皮生长因子(EGF)结构域、激活肽和类胰蛋白酶催化域(丝氨酸蛋白酶域)。该蛋白酶原进一步被加工成活性形式，通过二硫键连接的轻链和重链构成异质二聚体。FIX在内源性凝血途径中发挥着重要作用，活化的FIXa才能与活化的FVIII(FVIIIa)、磷脂和Ca²⁺一起将FX激活为FXa，启动共同凝血途径，发挥止凝血作用。目前研究已记载了超过100个FIX的突变；其中一些不引起任何临床症状，但其它则导致明显的出血性疾病。如果不及时治疗，血友病B会引起损伤后无法控制的肌肉、关节和体腔内出血，并可能导致死亡。过去该疾病治疗主要是施用来自人血浆制备的FIX。然而，一方面这具有随之而来的感染血源性病毒风险，包括人类免疫缺陷病毒(HIV)和丙型肝炎病毒(HCV)。另一方面天然FIX在人体内半衰期很短，约18～24小时，患者需要反复输血或血液制品，这样不仅费用昂贵，还可能引起严重的输血反应，凝血酶原复合物中微量的激活因子还可能激活凝血级联反应，引起血栓形成和栓塞。目前市售重组FIX的半衰期相对较短，只有18小时，这使得血友病人在发生出血后应急式按需治疗过程中抑或是出血发生前预防治疗应用中都需要接受频繁静脉注射给药。B型血友病人推荐每周接受2～3次，每次40～100IU/kg剂量注射FIX以预防出血事件发生。因而开发长效重组FIX制剂，具有延长的血浆半衰期不仅能减少用药次数、又可减轻患者身心负担，大大提高患者依从性。