[发明专利]一种低消旋杂质利拉鲁肽的合成方法

说明书

一种低消旋杂质利拉鲁肽的合成方法，包括如下步骤：合成得到前肽，使用固相合成法在前肽上偶联含有Thr‑Phe的2～5肽；进一步固相合成得到利拉鲁肽树脂，经侧链修饰后裂解或直接裂解、纯化、冻干，得到利拉鲁肽。提供的利拉鲁肽的合成方法有效抑制或减少了与产品性质极为相似的消旋杂质D‑Thr⁵的产生，有利于利拉鲁肽粗肽的纯化，同时保证其较高的收率，大大降低了生产成本；在利拉鲁肽合成过程中，二肽片段、三肽片段、四肽片段、五肽片段或其组合与Gly‑树脂的合成可同时进行，也缩短了一定的合成时间。

技术领域

本发明涉及一种多肽的合成方法，特别涉及一种低消旋杂质利拉鲁肽的合成方法。

背景技术

随着社会的发展，世界范围内糖尿病的发病率呈明显增加的趋势，2000年曾估计为2.8％，到2025年预计为4.3％，糖尿病患者人数也将从2000年的1.71亿增加到2025年的3.8亿。糖尿病分为妊娠期糖尿病、特异性糖尿病、I型糖尿病和II型糖尿病。其中，II型糖尿病又名非胰岛素依赖型糖尿病，特点是人体自身能够产生胰岛素，但细胞无法对其作出反应，使胰岛素的效果大打折扣。针对II型糖尿病的降糖药种类很多，包括二甲双胍、磺脲类药物和胰高血糖样肽-1(GLP-1)的受体激动素等，GLP-1的受体激动素是近年来研究的热点。

利拉鲁肽，人胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物中的一种，英文名为Liraglutide，是丹麦诺和诺德公司研制出的一种治疗II型糖尿病的药物，其注射剂分别于2010年1月25日获得FDA批准上市(商品名为Victoza)、2011年3月4日获得SFDA批准上市。利拉鲁肽作为GLP-1受体激动剂能起到良好的降低血糖作用。

目前，利拉鲁肽的合成，主要采用基因重组技术和逐步偶联的方法。采用基因重组技术合成利拉鲁肽时，技术难度较大，成本相对较高，中间体GLP-1(7-37)-OH需要HPLC反复纯化，再在液相条件下与Nα-alkanoyl-Glu(ONSu)-OtBu反应，并且由于GLP-1(7-37)-OH N端未保护以及侧链保护基全部脱除，会导致产生许多杂质，难以纯化。采用逐步偶联的方法进行利拉鲁肽合成时，本领域技术人员周知，以树脂为固相载体，与Fmoc-Gly-OH缩合反应获得Fmoc-Gly-树脂；通过固相合成法，按照利拉鲁肽主链肽序依次缩合具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中赖氨酸采用Fmoc-Lys(X)-OH(X为Lys侧链保护基团)或Fmoc-Lys(N-ε-(N-α-Palmitoyl-L-γ-glutamyl))-OH，每次缩合反应30-35min；利拉鲁肽树脂赖氨酸侧链经修饰后裂解或直接裂解；纯化，冻干得到利拉鲁肽。由于利拉鲁肽的序列较长且有较多的疏水氨基酸，逐步偶联时易形成β折叠，导致树脂收缩严重，延长反应时间，进而粗肽中产生较多与产品性质极为接近的消旋杂质NH₂-His-Ala-Glu-Gly-D-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N-ε-(N-α-Palmitoyl-L-γ-glutamyl))-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-COOH(D-Thr⁵利拉鲁肽)，纯化比较困难；同时树脂收缩严重，反应不完全，导致收率偏低。

一方面，消旋体副产物在结构上与利拉鲁肽非常接近，使得利拉鲁肽粗肽的纯化分离十分困难，使用多种纯化分离体系尝试皆不能达到良好的分离效果。如果进行多次分离，则可以预见分离会导致产品的显著损失；另一方面，消旋杂质的存在，对药品质量有着不利影响，不仅影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害。因此，在合成利拉鲁肽的制造工艺中，应当尽可能地减少消旋体副产物的产生。